ELISA是酶聯接(jie)免(mian)疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jian)稱(cheng)。它是繼免(mian)疫熒光(guang)和放射免(mian)疫技術(shu)之后(hou)發展起來的一種免(mian)疫酶技術(shu)。

ELISA試劑盒(he)包(bao)含預包(bao)被酶(mei)標(biao)(biao)板(ban)、檢(jian)測抗體、鏈酶(mei)親和(he)素標(biao)(biao)記的HRP、標(biao)(biao)準(zhun)品、標(biao)(biao)準(zhun)品稀(xi)釋液(ye)(ye)、TMB顯色液(ye)(ye)、終止(zhi)液(ye)(ye)、洗液(ye)(ye)、封板(ban)膜、檢(jian)測緩沖液(ye)(ye)等10個(ge)成分。

實驗前，請(qing)將試劑盒、樣(yang)本取出(chu)；室溫放置半小時(shi)，恢(hui)復至室溫。

第一步：ELISA緩沖液配制

吸(xi)(xi)取(qu)5毫升10x Assay Buffer緩沖(chong)液，至(zhi)50ml離心管，吸(xi)(xi)取(qu)50ml20x洗液至(zhi)1升量筒(tong)，加蒸餾水至(zhi)1000毫升。

第(di)二步：標準品溶(rong)解和稀釋

取出(chu)標準品(pin)，2000rpm 離(li)心2分鐘，以便管(guan)壁上的粉(fen)末(mo)集中到管(guan)底，根據(ju)標簽，加(jia)入一(yi)定的蒸餾水(shui)，蓋上蓋子，渦(wo)旋震蕩5秒，靜置10-30分鐘至粉(fen)末(mo)溶解，準備8個(ge)1.5毫(hao)升的EP管(guan)，標注S1至S7和空白，用于標準品(pin)對策(ce)梯度稀釋；

加入150微(wei)升(sheng)標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)，吸(xi)取150微(wei)升(sheng)重溶的標(biao)準品(pin)，至S1中進行(xing)2倍稀(xi)釋(shi)，吹(chui)打10次混勻，渦旋震蕩5秒(miao)，從S1管(guan)中吸(xi)取150微(wei)升(sheng)液(ye)體(ti)，至S2管(guan)中，吹(chui)打混勻，繼(ji)續以(yi)上步驟(zou)梯(ti)度稀(xi)釋(shi)至S2至S7；

第三步：稀釋檢測抗體

檢測抗(kang)體為100x濃縮液，所以吸取50微升(sheng)(sheng)檢測抗(kang)體，至5毫升(sheng)(sheng)1x Assay Buffer 震蕩混勻備用；

第四步：加樣

取出已恢復至室溫(wen)的酶標板，加(jia)入300微升洗液(ye)，以(yi)洗去包(bao)(bao)被(bei)抗(kang)體保(bao)護劑，使包(bao)(bao)被(bei)抗(kang)體處于活性狀態，靜置浸泡30秒。洗板結束(shu)后，立(li)即使用酶標板，不要讓酶標板干燥。