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1．無菌環境

無(wu)毒和無(wu)菌(jun)(jun)是體外培養(yang)細(xi)胞的(de)(de)首要(yao)條件。細(xi)胞在活體內，解毒系統和免疫系統可抵抗微生(sheng)物(wu)(wu)或其他(ta)有害(hai)物(wu)(wu)質的(de)(de)入侵，但(dan)細(xi)胞在體外培養(yang)的(de)(de)過程中，缺乏機體免疫系統的(de)(de)保護(hu)而喪失對微生(sheng)物(wu)(wu)的(de)(de)防御能(neng)力(li)和對有害(hai)物(wu)(wu)質的(de)(de)解毒能(neng)力(li)。為保證細(xi)胞能(neng)在體外環境中生(sheng)長繁殖，必須要(yao)確保無(wu)菌(jun)(jun)工作(zuo)區域、良好(hao)的(de)(de)個人衛生(sheng)、無(wu)菌(jun)(jun)試(shi)劑和培養(yang)基以(yi)及無(wu)菌(jun)(jun)操作(zuo)。

常見(jian)的(de)微生(sheng)物污(wu)染有支原體(ti)、細菌(jun)(jun)、真(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)。支原體(ti)無致死(si)毒性(xing)，可(ke)與細胞長期共存，對細胞有潛在影(ying)響(xiang)，但(dan)體(ti)積小(xiao)，不易鑒別，可(ke)借(jie)助于地衣(yi)紅或(huo)Hoechst33342染色來(lai)進行檢測。細菌(jun)(jun)增殖快，在短時間內即(ji)可(ke)大量(liang)擴增，并產生(sheng)毒素殺死(si)細胞。真(zhen)(zhen)菌(jun)(jun)的(de)種(zhong)類繁多，肉(rou)眼可(ke)見(jian)，漂浮(fu)于培養液面上，可(ke)呈絲狀(zhuang)、管狀(zhuang)或(huo)樹枝狀(zhuang)等。

2.合適的溫度

一般哺乳類與禽類細(xi)(xi)胞在體外培養的適宜溫(wen)度(du)是37～38℃，不(bu)適宜的環境(jing)溫(wen)度(du)會影(ying)響細(xi)(xi)胞的生長(chang)。細(xi)(xi)胞對(dui)低溫(wen)的耐受(shou)能力要強于(yu)(yu)對(dui)高溫(wen)的耐受(shou)能力，在低溫(wen)下(xia)，細(xi)(xi)胞的代(dai)謝活力及核(he)分裂能力降(jiang)低。若溫(wen)度(du)不(bu)低于(yu)(yu)0℃，雖然(ran)細(xi)(xi)胞代(dai)謝受(shou)到影(ying)響，但(dan)無損傷作用；25～35℃時，細(xi)(xi)胞以緩慢的速度(du)生長(chang)；但(dan)若被置于(yu)(yu)40℃數小時，則不(bu)僅不(bu)利(li)于(yu)(yu)細(xi)(xi)胞生存(cun)、生長(chang)，甚(shen)至可導致其死亡。

3．氣體環境與pH

細(xi)(xi)胞的體外培養(yang)需要理想的氣(qi)體環(huan)境，氧(yang)氣(qi)、二氧(yang)化碳(tan)是(shi)(shi)細(xi)(xi)胞生(sheng)存的必要條件。氧(yang)氣(qi)參與(yu)(yu)細(xi)(xi)胞的三羧酸循環(huan)，為(wei)細(xi)(xi)胞生(sheng)存、代謝(xie)與(yu)(yu)合(he)成提供能(neng)量(liang)；二氧(yang)化碳(tan)既是(shi)(shi)細(xi)(xi)胞的代謝(xie)產物(wu)，是(shi)(shi)細(xi)(xi)胞生(sheng)長的必需成分，又(you)與(yu)(yu)維持培養(yang)液(ye)的pH有(you)關。大多數(shu)細(xi)(xi)胞適宜(yi)的pH范圍往往是(shi)(shi)7.2～7.4。在開放式培養(yang)中，以5%的二氧(yang)化碳(tan)氣(qi)體比例為(wei)宜(yi)。

4.適宜的滲透壓

高(gao)滲(shen)溶液或低滲(shen)溶液會引起(qi)細(xi)胞(bao)發生褶皺、腫(zhong)脹、破裂。因(yin)此，滲(shen)透(tou)壓(ya)是體(ti)外培養細(xi)胞(bao)的重要條件之一。多數體(ti)外培養的細(xi)胞(bao)對(dui)滲(shen)透(tou)壓(ya)都有一定的耐受能力，實際應用中(zhong)，260～320mmol/L的滲(shen)透(tou)壓(ya)可(ke)適(shi)用于大多數細(xi)胞(bao)。

每種待(dai)測(ce)物都有一個可測(ce)定的濃度或(huo)活(huo)性范圍(wei)，常見細胞(bao)樣品(pin)結果(guo)若超過此范(fan)(fan)圍(wei)，分析儀將顯示結果(guo)超過范(fan)(fan)圍(wei)的提示，表(biao)示試劑已經變質，應更換合格的試劑，若使用連續(xu)監測(ce)法(fa)，兩(liang)點法(fa)測(ce)定酶活性時，若酶活性非(fei)常高，底物接近(jin)被(bei)耗(hao)盡，吸(xi)(xi)光度(du)(du)上升或下降會超過某一吸(xi)(xi)光度(du)(du)，變化范(fan)(fan)圍(wei)，監測(ce)期的吸(xi)(xi)光度(du)(du)將偏離線性，使測(ce)定結果(guo)不可靠。