在(zai)ELISA中，進行(xing)各項實驗條件的選擇是很重(zhong)要的，其中包括:

(1)固相載體的選(xuan)擇: 許(xu)多(duo)物質可(ke)作為固相載體，如聚氯乙(yi)烯、聚苯乙(yi)烯、聚丙酰胺(an)和纖維(wei)素等。其(qi)(qi)形式可(ke)以(yi)是凹孔(kong)平板(ban)、試管、珠粒等。目(mu)前常用的是40孔(kong)聚苯乙(yi)烯凹孔(kong)板(ban)。不管何(he)種載體，在使用前均(jun)可(ke)進(jin)行篩(shai)選(xuan):用等量抗(kang)原包被，在同(tong)一實驗(yan)條件下(xia)進(jin)行反應(ying)，觀察(cha)其(qi)(qi)顯色反應(ying)是否均(jun)一性，據(ju)此(ci)判明其(qi)(qi)吸附(fu)性能(neng)是否良好。

(2)ELISA試劑盒包(bao)被(bei)抗體(或抗原)的選擇: 將(jiang)抗體(或抗原)吸附(fu)在固(gu)相載體表面時(shi)，要(yao)求純度(du)要(yao)好,吸附(fu)時(shi)一般(ban)(ban)要(yao)求PH在9.0~9.6之間。吸附(fu)溫度(du)，時(shi)間及其蛋白(bai)量也有(you)一定影(ying)響,一般(ban)(ban)多采用4C18~24小時(shi)。蛋白(bai)質包(bao)被(bei)的合適濃度(du)需進行(xing)滴定: 即用不同(tong)(tong)的蛋白(bai)質濃度(du)(0.1、1.0和10μg/m1等(deng))進行(xing)包(bao)被(bei)后，在其它試驗條件相同(tong)(tong)時(shi)，觀察(cha)陽性標本(ben)的OD值。對于(yu)多數(shu)蛋白(bai)質來說通常為(wei)1~10μg/m1。

(3)酶標(biao)(biao)記(ji)抗體(ti)工作濃度的(de)選擇: 首(shou)先(xian)用直接ELISA法(fa)(fa)進(jin)行(xing)初(chu)步效價的(de)滴定(ding)(見酶標(biao)(biao)記(ji)抗體(ti)部份)。然(ran)后再固定(ding)其(qi)(qi)它條(tiao)件(jian)或采取“方陣法(fa)(fa)"(包被物、待(dai)檢樣品的(de)參考品及(ji)酶標(biao)(biao)記(ji)抗體(ti)分(fen)別為不同的(de)稀釋度)在正式實驗系統里準確地(di)滴定(ding)其(qi)(qi)工作濃度。

(4)ELISA試劑盒的酶的底(di)物(wu)及供氫(qing)體(ti)的選(xuan)擇: 對供氫(qing)體(ti)的選(xuan)擇要求(qiu)是(shi)(shi)價廉、安(an)全、有(you)明顯(xian)地顯(xian)色(se)反應，而本身無色(se)。有(you)些供氫(qing)體(ti)(如(ru)OPD等(deng))有(you)潛(qian)在的致癌(ai)(ai)作(zuo)用(yong)(yong)，應注意防(fang)護。有(you)條(tiao)件者應使用(yong)(yong)不致癌(ai)(ai)、靈敏(min)度高的供氫(qing)體(ti)，如(ru)TMB和(he)ABTS是(shi)(shi)目前(qian)較(jiao)為滿意的供氫(qing)體(ti)。底(di)物(wu)作(zuo)用(yong)(yong)一(yi)段時間(jian)(jian)后，應加(jia)入強酸或強堿(jian)以終止反應。通(tong)常底(di)物(wu)作(zuo)用(yong)(yong)時間(jian)(jian)，以10-30分鐘為宜。底(di)物(wu)使用(yong)(yong)液必須新(xin)鮮(xian)配制(zhi)，尤其(qi)是(shi)(shi)H202在臨用(yong)(yong)前(qian)加(jia)入。