ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。除了盒子本身質量外，操作中很多因素都影響試驗的正常結果。*常出現的問題是顯色淡，靈敏度偏低、重復性不佳、假陽性結果和假陰性結果，不管出現什么樣的結果，不但浪費客戶的金錢、樣本、精力，更重要的是對臨床做出了危險判斷。在這里我們分析ELISA試驗非正常檢(jian)測(ce)(ce)結(jie)果(guo)產生的(de)常見原因，并探討其解決辦法，以提高檢(jian)測(ce)(ce)質量。

1. 標本的采集與保存

當標本采(cai)集保存不當產生溶血時(shi)，紅細胞中(zhong)的血紅蛋(dan)白釋放到血清中(zhong)，血紅蛋(dan)白具有(you)過氧化物酶的性質，其通過吸附或(huo)“PP效應"

(蛋白質間(jian)(jian)相互(hu)吸(xi)附的現(xian)象(xiang))結合后，可催化、B液顯色而造成假陽(yang)性標(biao)(biao)本采集保存不當致(zhi)細菌(jun)污染，菌(jun)體中(zhong)可能含有內源(yuan)性HRP，會產生假陽(yang)性反應;標(biao)(biao)本在(zai)冰箱(xiang)中(zhong)保存時間(jian)(jian)過(guo)長導(dao)致(zhi)血清(qing)IgG聚(ju)合，易使間(jian)(jian)接法(fa)的試驗本底加深。因此，標(biao)(biao)本宜在(zai)新鮮時檢測。

反復(fu)凍(dong)融血清會使抗體(ti)效(xiao)價(jia)跌落(luo)，所以測(ce)抗體(ti)的血清標本如需保存做多次檢(jian)測(ce)，宜(yi)少里(li)分裝凍(dong)存。

2.加樣

如果ELISA試驗樣品(pin)稀(xi)釋液少加(jia)或血清(qing)多加(jia)，都會(hui)引起本底(di)增高(gao)。對于間接(jie)法來說，受上述兩個(ge)因(yin)索影(ying)響更大。因(yin)為血清(qing)中(zhong)受檢的(de)(de)特異(yi)性(xing)(xing)IgG只占(zhan)IgG中(zhong)的(de)(de)一小(xiao)部分。IgG的(de)(de)吸附性(xing)(xing)很強(qiang)，非(fei)特異(yi)性(xing)(xing)IgG可直接(jie)吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的(de)(de)夫面(mian)。這些非(fei)特異(yi)性(xing)(xing)的(de)(de)IgG均可以和酶標二抗發(fa)生反應而(er)造(zao)成較高(gao)陰性(xing)(xing)本底(di)或假(jia)陽性(xing)(xing)。如果加(jia)入的(de)(de)血清(qing)過多，高(gao)于規定的(de)(de)稀(xi)釋倍數，極(ji)易造(zao)成高(gao)值陰性(xing)(xing)。反之(zhi)，造(zao)成假(jia)陰性(xing)(xing)。