在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。

ELISA屬固相免疫測(ce)定，抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)、抗(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)結(jie)合只在固相表面上發(fa)生。以抗(kang)(kang)體(ti)(ti)包被的(de)(de)(de)(de)夾心法為例，加(jia)(jia)入板(ban)孔中(zhong)的(de)(de)(de)(de)標(biao)本，其中(zhong)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)并不(bu)是(shi)都有均等(deng)的(de)(de)(de)(de)和固相抗(kang)(kang)結(jie)合的(de)(de)(de)(de)機會，只有貼近孔壁(bi)的(de)(de)(de)(de)一層溶液中(zhong)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)直(zhi)接與抗(kang)(kang)體(ti)(ti)接觸(chu)。這(zhe)是(shi)一個(ge)逐步(bu)平衡的(de)(de)(de)(de)過程，因此(ci)(ci)需(xu)經擴散才能達到反(fan)(fan)應的(de)(de)(de)(de)終點(dian)。在其后加(jia)(jia)入的(de)(de)(de)(de)酶標(biao)記抗(kang)(kang)體(ti)(ti)與固相抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)結(jie)合也同樣如此(ci)(ci)。這(zhe)就是(shi)為什么(me)ELISA反(fan)(fan)應總是(shi)需(xu)要一定時間的(de)(de)(de)(de)溫育。

ELISA試劑盒溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時，產物的生成可達。為加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以形成多的沉淀。但因所需時間太長，在ELISA中一般不予采用。

保溫的(de)方式除有的(de)ELISA儀器附有特制(zhi)的(de)電熱塊外(wai)，一般(ban)均采用(yong)水(shui)浴，可將(jiang)ELISA板置于水(shui)浴箱中，ELISA板底(di)應(ying)(ying)(ying)貼(tie)著水(shui)面(mian)，使溫度迅速平(ping)衡。為(wei)避免(mian)蒸發，板上應(ying)(ying)(ying)加蓋，也可用(yong)塑料貼(tie)封紙(zhi)或保鮮膜覆蓋板孔，此(ci)時(shi)可讓反應(ying)(ying)(ying)板漂浮在(zai)(zai)(zai)水(shui)面(mian)上。若用(yong)保溫箱，ELISA板應(ying)(ying)(ying)放在(zai)(zai)(zai)濕(shi)(shi)(shi)盒內(nei)，濕(shi)(shi)(shi)盒要(yao)選用(yong)傳熱性良好的(de)材(cai)料如金屬等，在(zai)(zai)(zai)盒底(di)墊(dian)濕(shi)(shi)(shi)的(de)紗布，后將(jiang)ELISA板放在(zai)(zai)(zai)濕(shi)(shi)(shi)紗布上。濕(shi)(shi)(shi)盒應(ying)(ying)(ying)先放在(zai)(zai)(zai)保溫箱中預(yu)溫至規定(ding)的(de)溫度，特別是在(zai)(zai)(zai)氣(qi)溫較低的(de)時(shi)候更(geng)應(ying)(ying)(ying)如此(ci)。無論是水(shui)浴還是濕(shi)(shi)(shi)盒溫育(yu)，反應(ying)(ying)(ying)板均不(bu)宜(yi)疊(die)放，以保證各板的(de)溫度都能迅速平(ping)衡。

室溫(wen)(wen)溫(wen)(wen)育(yu)(yu)的(de)反應，操(cao)作(zuo)時(shi)(shi)(shi)的(de)室溫(wen)(wen)應嚴(yan)格限制在(zai)規(gui)定的(de)范圍內，標準(zhun)室溫(wen)(wen)溫(wen)(wen)度是指20-25℃，但具體(ti)操(cao)作(zuo)時(shi)(shi)(shi)可根據說明書的(de)要(yao)求控制溫(wen)(wen)育(yu)(yu)。室溫(wen)(wen)溫(wen)(wen)育(yu)(yu)時(shi)(shi)(shi)，ELISA板只要(yao)平置于操(cao)作(zuo)臺上(shang)即(ji)可。應注意溫(wen)(wen)育(yu)(yu)的(de)溫(wen)(wen)度和時(shi)(shi)(shi)間應按(an)規(gui)定力求準(zhun)確。為保證這一點，一個人(ren)操(cao)作(zuo)時(shi)(shi)(shi)，一次不宜多于兩塊板同(tong)時(shi)(shi)(shi)測定。

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以上是說說ELISA試劑盒的保溫方式有哪些。