ELISA試劑盒在科研領域應(ying)用(yong)廣泛(fan)，靈(ling)敏(min)度高和特(te)異性強的(de)(de)特(te)點更是(shi)被認可(ke)。那我們(men)在實驗(yan)中，如遇到試劑(ji)盒需(xu)(xu)要加液，那加液的(de)(de)過程(cheng)中是(shi)不是(shi)也有我們(men)應(ying)該(gai)注意(yi)的(de)(de)地方呢？今天上海研域生(sheng)物就給(gei)大家帶來有關“ELISA試劑(ji)盒加液過程(cheng)中需(xu)(xu)要注意(yi)什么"的(de)(de)解(jie)答(da)，下面請(qing)看(kan)具體講解(jie)。

在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。

加(jia)樣時應將所(suo)加(jia)物加(jia)在ELISA板孔的底(di)部，避免加(jia)在孔壁(bi)上部，并(bing)注(zhu)意不可濺出(chu)，不可產生氣泡。

加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)本一般(ban)用微量加(jia)(jia)(jia)(jia)樣器，按(an)(an)規(gui)(gui)定(ding)(ding)的量加(jia)(jia)(jia)(jia)入板孔中。每次(ci)加(jia)(jia)(jia)(jia)標(biao)本應更換吸嘴，以免(mian)發生交叉污(wu)染(ran)，也可(ke)用一次(ci)性的定(ding)(ding)量塑(su)料管加(jia)(jia)(jia)(jia)樣。有(you)此測定(ding)(ding)（如間接法(fa)ELISA）需(xu)用稀(xi)釋(shi)的血清，可(ke)在(zai)(zai)試管中按(an)(an)規(gui)(gui)定(ding)(ding)的稀(xi)釋(shi)度稀(xi)釋(shi)后再加(jia)(jia)(jia)(jia)樣。也可(ke)在(zai)(zai)板孔中加(jia)(jia)(jia)(jia)入稀(xi)釋(shi)液，再在(zai)(zai)其(qi)中加(jia)(jia)(jia)(jia)入血清標(biao)本，然后在(zai)(zai)微型震蕩(dang)器上震蕩(dang)1分鐘(zhong)以保證混和。

加酶(mei)結合物應(ying)用(yong)(yong)液和(he)底(di)物應(ying)用(yong)(yong)液時可用(yong)(yong)定量多道加液器，使加液過(guo)程迅速完成。

作為ELISA測(ce)定(ding)的標(biao)(biao)本(ben)十分(fen)廣(guang)泛，體液(ye)(ye)（如(ru)(ru)(ru)血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)）、分(fen)泌物（唾(tuo)液(ye)(ye)）和(he)排(pai)泄物（如(ru)(ru)(ru)尿(niao)液(ye)(ye)、糞便(bian)）等(deng)(deng)均可作標(biao)(biao)本(ben)以(yi)測(ce)定(ding)其(qi)中某種抗(kang)(kang)體或(huo)抗(kang)(kang)原成份。有(you)(you)些標(biao)(biao)本(ben)可直接進行(xing)測(ce)定(ding)（如(ru)(ru)(ru)血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)、尿(niao)液(ye)(ye)），有(you)(you)些則(ze)需經預處理（如(ru)(ru)(ru)糞便(bian)和(he)某些分(fen)泌物）。大部分(fen)ELISA檢測(ce)均以(yi)血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)為標(biao)(biao)本(ben)。血(xue)(xue)(xue)(xue)漿中除尚(shang)含有(you)(you)纖維蛋(dan)白原和(he)抗(kang)(kang)凝劑(ji)外，其(qi)他成份均同(tong)等(deng)(deng)于(yu)血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)。制備血(xue)(xue)(xue)(xue)漿標(biao)(biao)本(ben)需借助于(yu)抗(kang)(kang)凝劑(ji)，而血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)標(biao)(biao)本(ben)只要待血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)自然凝固(gu)后(hou)即(ji)可取得。除特殊情況外，在醫學檢驗中均以(yi)血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)作為檢測(ce)標(biao)(biao)本(ben)。在ELISA中血(xue)(xue)(xue)(xue)漿和(he)血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)可同(tong)等(deng)(deng)應用。血(xue)(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)標(biao)(biao)本(ben)可按常(chang)規方法采集，應注意避免溶血(xue)(xue)(xue)(xue)，紅(hong)細(xi)胞溶解時會釋放出具(ju)有(you)(you)過氧化物酶活性的物質，以(yi)HRP為標(biao)(biao)記的ELISA測(ce)定(ding)中，溶血(xue)(xue)(xue)(xue)標(biao)(biao)本(ben)可能(neng)會增加非(fei)特異性顯色。

ELISA試劑盒血清標本(ben)宜(yi)(yi)在新鮮時(shi)檢(jian)(jian)測(ce)。如(ru)有細(xi)菌(jun)(jun)污(wu)染，菌(jun)(jun)體中(zhong)可(ke)(ke)能含有內源性(xing)HRP，也會產(chan)生假(jia)陽性(xing)反(fan)應。如(ru)在冰(bing)(bing)(bing)箱中(zhong)保存(cun)過久(jiu)，其中(zhong)的(de)(de)可(ke)(ke)發生聚合，在間接(jie)法(fa)ELISA試劑盒(he)中(zhong)可(ke)(ke)使本(ben)底加深。一(yi)般說(shuo)來，在5天內測(ce)定的(de)(de)血清標本(ben)可(ke)(ke)放置于4℃，超過一(yi)周測(ce)定的(de)(de)需低溫冰(bing)(bing)(bing)存(cun)。凍結(jie)血清融(rong)解后，蛋白質局(ju)部濃縮，分布不均，應充分混(hun)勻(yun)(yun)宜(yi)(yi)輕緩，避免氣泡(pao)，可(ke)(ke)上(shang)下(xia)顛倒混(hun)和，不要在混(hun)勻(yun)(yun)器(qi)上(shang)強(qiang)烈振蕩。混(hun)濁或(huo)(huo)有沉(chen)淀(dian)的(de)(de)血清標本(ben)應先離心或(huo)(huo)過濾，澄(cheng)清后再檢(jian)(jian)測(ce)。反(fan)復凍融(rong)會使抗(kang)體效價跌(die)落(luo)，所以測(ce)抗(kang)體的(de)(de)血清標本(ben)如(ru)需保存(cun)作多(duo)次檢(jian)(jian)測(ce)，宜(yi)(yi)少量(liang)分裝冰(bing)(bing)(bing)存(cun)。保存(cun)血清自采(cai)集時(shi)就應注(zhu)意無菌(jun)(jun)操(cao)作，也可(ke)(ke)加入適當防腐劑。