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    大鼠胰島素細胞傳代的方法

    發布時間: 2021-12-09  點擊次數: 1751次

    大鼠胰島素細胞傳代方法:我們在收到細胞后,取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。


    如果細胞已長(chang)滿,即可進行傳代培養。具(ju)體步驟如下:

    1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次(ci)。

    2. 加1ml消化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)瓶(ping)中,倒(dao)(dao)轉放于37度培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)箱(xiang)1-3分鐘預熱,然后又將培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)瓶(ping)倒(dao)(dao)轉大約30秒(miao)后,在倒(dao)(dao)置顯微鏡(jing)下觀察細胞消化情況,若(ruo)細胞大部分變圓分散(san),輕敲幾下培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)瓶(ping),細胞隨即脫落下來(lai)。

    3. 加入6-8ml*培(pei)養(yang)基,吸出,分到新的培(pei)養(yang)瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天(tian)1次。 

    細胞

    如果細胞未長滿(man),用75%酒精噴灑整個瓶(ping)消毒后放到超菌臺內,嚴格(ge)無菌操作,打開細胞培(pei)養瓶(ping),吸出(chu)培(pei)養液(ye),僅留下10ml培(pei)養液(ye)在瓶(ping)內繼(ji)續(xu)培(pei)養。


    細胞來源(yuan)于(yu)(yu)美國(guo)ScienCell實(shi)驗室、美國(guo)ATCC細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)庫(ku),所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)均為原代(dai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao),非細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)系。細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)經過嚴格(ge)的控制(從組織來源(yuan)、實(shi)驗室條件等方面),純度可達98%。不(bu)同(tong)的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)傳代(dai)次數不(bu)一。多數細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)種類是從胚胎提取(qu),于(yu)(yu)原代(dai)(或二(er)代(dai))凍存在液氮(dan)(dan)中(zhong)。大(da)鼠胰島素細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)采用(yong)干(gan)冰運輸,客戶收到細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)后(hou)(hou),從干(gan)冰中(zhong)取(qu)出放(fang)入(ru)液氮(dan)(dan)中(zhong)保存,待實(shi)驗安排好后(hou)(hou),解(jie)凍后(hou)(hou)即可以進行(xing)復蘇培養。美國(guo)ATCC細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)庫(ku)、ScienCell實(shi)驗室的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)、培養基(ji)都是經過嚴格(ge)檢驗,分離、配制而(er)成,產品質(zhi)量過硬。

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