牛16號染色體開放(fang)閱(yue)讀(du)框89(C16orf89)試劑(ji)盒(he)

本試劑盒僅供(gong)體外研究使用，不用于臨(lin)床診斷(duan)

本(ben)試(shi)劑盒用于體(ti)外定量檢測血(xue)清、血(xue)漿、組織勻(yun)漿及相關液體(ti)樣本(ben)中牛(niu)16號染色體(ti)開放閱(yue)讀框89(C16orf89)的(de)含量。

有效期：6個月

保存(cun)條件：2-8℃

試(shi)劑盒組成(cheng)：

備注：

1.（96T/48T）打(da)開包裝(zhuang)后請(qing)及時檢查所有物品是否齊(qi)全(quan)。

2. 標準品濃度依次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過大量正(zheng)常標本(ben)(ben)檢(jian)驗，標本(ben)(ben)的正(zheng)常濃(nong)(nong)度值均在試(shi)劑盒提(ti)供(gong)的檢(jian)測(ce)范圍內(nei)，實驗過程中直接取50μL樣(yang)(yang)(yang)本(ben)(ben)上(shang)樣(yang)(yang)(yang)即可。當有部分樣(yang)(yang)(yang)本(ben)(ben)值超過大標準品濃(nong)(nong)度時(shi)，可用(yong)樣(yang)(yang)(yang)本(ben)(ben)稀釋液(ye)將標本(ben)(ben)進行適當稀釋后再(zai)進行實驗。

檢(jian)測前準(zhun)備工作：

?

1.請提前20分鐘從冰箱(xiang)中取(qu)出試劑(ji)盒，平衡至室溫。

2.從冰箱(xiang)中取出的濃(nong)(nong)(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)(di)液(ye)可(ke)能有結(jie)晶，屬于正常(chang)現(xian)象；放置(zhi)室溫，輕搖(yao)均勻，待結(jie)晶溶(rong)解后再配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)(di)液(ye)。可(ke)將(jiang)20ml濃(nong)(nong)(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)(di)液(ye)用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或去離子(zi)水(shui)稀釋配(pei)置(zhi)成(cheng)400ml工作濃(nong)(nong)(nong)度的洗(xi)滌(di)(di)液(ye)，未用完的放回4℃

3.20×洗(xi)滌緩(huan)沖液的(de)稀釋：蒸(zheng)餾水(shui)按(an)1：20稀釋，即(ji)1份(fen)20×洗(xi)滌緩(huan)沖液加19份(fen)蒸(zheng)餾水(shui)。

實(shi)驗(yan)原理：

牛16號染色體開放閱讀框89(C16orf89)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被牛16號染色體開放閱讀框89(C16orf89)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛16號染色體開放閱讀框89(C16orf89)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗所需自(zi)備(bei)試驗器材：

1.酶標(biao)儀（450nm）

2.高精度加(jia)樣器及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫(wen)箱

4.蒸餾水(shui)(shui)或去(qu)離(li)子(zi)水(shui)(shui)

樣本處理及要(yao)求(qiu)：

1.血(xue)清：將收集(ji)于(yu)血(xue)清分離(li)管的全血(xue)標本(ben)在(zai)室溫放置(zhi)2小時或(huo)(huo)4℃過(guo)夜，然(ran)后(hou)1000×g離(li)心20 分鐘(zhong)，取上清即可，或(huo)(huo)將上清置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)-80℃保存(cun)，但應避(bi)免反復凍融(rong)。

2.血漿(jiang)：用(yong)EDTA或(huo)肝素(su)作為抗凝劑(ji)采集標本，并將標本在采集后的30分(fen)鐘內于(yu)2-8℃ 1000×g離心(xin)15分(fen)鐘，取上清即可檢(jian)測，或(huo)將上清置于(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反復凍融(rong)。

3.組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)：用預冷的(de)(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗組織(zhi)，去除(chu)殘留血(xue)液（勻(yun)漿(jiang)(jiang)中(zhong)裂解的(de)(de)(de)紅細胞(bao)會影響測量(liang)(liang)結(jie)果(guo)），稱重后(hou)將(jiang)組織(zhi)剪碎(sui)。將(jiang)剪碎(sui)的(de)(de)(de)組織(zhi)與對(dui)應體積的(de)(de)(de)PBS（一般按(an)1:9的(de)(de)(de)重量(liang)(liang)體積比，比如1g的(de)(de)(de)組織(zhi)樣品(pin)對(dui)應9mL的(de)(de)(de)PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄(lu)。推薦在PBS中(zhong)加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃(li)勻(yun)漿(jiang)(jiang)器中(zhong)，于冰上充分研(yan)磨。為(wei)了進一步裂解組織(zhi)細胞(bao)，可以對(dui)勻(yun)漿(jiang)(jiang)液進行超聲破碎(sui)，或反復凍融。后(hou)將(jiang)勻(yun)漿(jiang)(jiang)液于5000×g離心5~10分鐘(zhong)，取上清檢測。

4.細胞培養物上(shang)清(qing)：請1000×g離心20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢測，或將(jiang)上(shang)清(qing)置于-20℃或-80℃保(bao)存，但應避免反復凍(dong)融。

5.其它生(sheng)物標本：1000×g離心20分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即可檢測(ce)。

6.樣品(pin)外觀(guan)：樣品(pin)應清澈透明，懸(xuan)浮物應離心去(qu)除(chu)。

7.樣(yang)品(pin)保存：樣(yang)品(pin)收集后若(ruo)在(zai)1周內進(jin)行(xing)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)的可(ke)保存于4℃，若(ruo)不能及時檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)，請(qing)按一次(ci)使用量分裝(zhuang)，凍(dong)存于-20℃（1個(ge)月(yue)內檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)），或-80℃（6個(ge)月(yue)內檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)），避免(mian)反復凍(dong)融，標本溶(rong)血(xue)會(hui)影(ying)響后檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)結果，因此溶(rong)血(xue)標本不宜進(jin)行(xing)此項檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)。

注意事(shi)項：

1.嚴格按(an)照規(gui)定的時間和(he)溫(wen)度(du)進行(xing)溫(wen)育以保證(zheng)準(zhun)確結果(guo)。所有試劑都必須在(zai)使用前達到室溫(wen)20-25℃。使用后(hou)立即冷藏保存試劑。

2.洗(xi)板不正(zheng)確可(ke)以導致不準確的(de)結果。在加入底物前(qian)確保(bao)盡量吸干(gan)孔(kong)內液體。溫育過程中不要讓(rang)微孔(kong)干(gan)燥掉。

3.消(xiao)除板底殘(can)留的液體和手(shou)指(zhi)印，否則影響OD值。

4.底物顯色(se)(se)液(ye)(ye)應呈無(wu)色(se)(se)或很淺的顏(yan)色(se)(se)，已經變藍的底物液(ye)(ye)不能使(shi)用。

5.避免試劑(ji)和標本的(de)交叉污(wu)染(ran)以免造成錯(cuo)誤結果(guo)。

6.在儲(chu)存和溫(wen)育時避免強(qiang)光直接(jie)照射。

7.平(ping)衡至室溫后再(zai)打開密(mi)封袋以防水滴凝(ning)聚在冷(leng)板(ban)條上。

8.任何(he)反應試(shi)劑(ji)(ji)不能接觸漂白溶劑(ji)(ji)或(huo)漂白溶劑(ji)(ji)所散發的(de)強烈氣體。任何(he)漂白成(cheng)分都(dou)會(hui)破壞試(shi)劑(ji)(ji)盒中反應試(shi)劑(ji)(ji)的(de)生物活性。

9.不(bu)能使用過期產(chan)品。

10.如果可能傳播疾病，所有的(de)樣品都應管理好，按照(zhao)規定的(de)程(cheng)序處理樣品和(he)檢測裝置。

操作(zuo)步(bu)驟：

1．從室(shi)溫(wen)平衡60min后的鋁(lv)箔袋(dai)中取出所需(xu)板條，剩(sheng)余板條用自封(feng)(feng)袋(dai)密封(feng)(feng)放回4℃。

2．設置(zhi)標(biao)(biao)準(zhun)品孔和樣本孔，標(biao)(biao)準(zhun)品孔各加不同濃度的標(biao)(biao)準(zhun)品50μL。

3．樣本(ben)(ben)孔中a加入待測樣本(ben)(ben)50μL；空白(bai)孔不(bu)加。

4．除(chu)空白(bai)孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣本孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加入辣根過氧化物(wu)酶（HRP）標記的檢(jian)測抗體100μL，用封板膜(mo)封住(zhu)反應孔(kong)，37℃水浴(yu)鍋(guo)或(huo)恒溫箱(xiang)溫育60min。

5．棄去液體(ti)，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍干(gan)，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍干(gan)，如此重復(fu)洗板5次（也(ye)可用洗板機(ji)洗板）。

6．每孔(kong)加入底物A、B各50μL，37℃避光(guang)孵(fu)育15min。

7．每(mei)孔(kong)加入(ru)終止液(ye)50μL，15min內，在450nm波長處測定各(ge)孔(kong)的OD值。

實(shi)驗結果計(ji)算：

繪制(zhi)(zhi)標(biao)準(zhun)曲線(xian)：在Excel工作表(biao)中，以標(biao)準(zhun)品(pin)濃度作橫坐標(biao)，對應OD值(zhi)作縱坐標(biao)，繪制(zhi)(zhi)出標(biao)準(zhun)品(pin)線(xian)性回(hui)歸曲線(xian)，按曲線(xian)方程計算(suan)各樣本濃度值(zhi)。

（此圖僅(jin)供參考）

性(xing)能：

1. 檢測范圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度：低檢測(ce)濃度小于1.0 pg/mL。

3.特異(yi)性(xing)(xing)：不(bu)與其它可溶性(xing)(xing)結構(gou)類似物(wu)交叉(cha)反應。

4.重(zhong)復性：板(ban)內變(bian)異系數(shu)小(xiao)于(yu)10% ，板(ban)間(jian)變(bian)異系數(shu)小(xiao)于(yu)15% 。

牛16號染色體開放閱讀框89(C16orf89)試劑盒技術小提示：

1.當混(hun)合或(huo)重溶(rong)蛋白溶(rong)液(ye)時，盡量避(bi)免起(qi)沫。

2.為(wei)了避(bi)免(mian)交(jiao)叉感染，配(pei)置(zhi)不同(tong)濃度標(biao)準品、上(shang)樣(yang)、加不同(tong)試(shi)劑(ji)都需要更(geng)換槍頭。另外不同(tong)試(shi)劑(ji)請(qing)分別使用不同(tong)的移液槽(cao)。

3.每次孵育時，請正確(que)使用封板膠可保(bao)證結果的(de)準確(que)性(xing)。

4.混合后的(de)顯色(se)底物(wu)在上板前(qian)應為無色(se)，請避光保存；假如微孔板后，將(jiang)由(you)物(wu)色(se)變(bian)成不同深度的(de)藍色(se)。

5.終止液上板(ban)順序應(ying)同(tong)顯(xian)色底物上板(ban)順序一致；加入(ru)終止液后，孔內(nei)顏色由藍(lan)變黃；若孔內(nei)有綠色，則表明孔內(nei)液體(ti)未混勻；請充分混合。

說明(ming)：

1.由于現(xian)有(you)條件(jian)及科學技(ji)術(shu)水平尚不能對所(suo)有(you)供(gong)貨商提供(gong)的所(suo)有(you)原(yuan)料進行全面的鑒定與分(fen)析(xi)，本(ben)產品可能存(cun)在(zai)一定的質量技(ji)術(shu)風險。

2.實(shi)驗(yan)(yan)結果(guo)與(yu)試劑的(de)有效性、實(shi)驗(yan)(yan)者的(de)相關操作以及當時的(de)實(shi)驗(yan)(yan)環境密切相關，請務必準備充足的(de)標本備份。

3.不同批次的同一(yi)產(chan)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及(ji)顯色時間(jian)等，請依據試(shi)劑盒(he)內說明(ming)書進行實驗(yan)操作(zuo)，網站電子(zi)版說明(ming)書僅作(zuo)參考。

4.只有全(quan)部使用(yong)本試劑(ji)盒配套試劑(ji)才能(neng)保證檢測效果(guo)，不能(neng)混用(yong)其他(ta)制造商的(de)產品。只有嚴格遵守本試劑(ji)盒的(de)實驗說明(ming)才會得到(dao)檢測結(jie)果(guo)。