大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒

本(ben)試(shi)劑盒僅供(gong)體外研(yan)究使用，不用于臨(lin)床(chuang)診斷

本試劑盒用于體外定量(liang)檢測血(xue)清、血(xue)漿、組織勻漿及(ji)相關液體樣本中大鼠(shu)α 干擾(rao)素(IFN-α )的(de)含(han)量(liang)。

有效期：6個(ge)月

保(bao)存(cun)條件：2-8℃

試劑盒組成(cheng)：

備(bei)注：

1.（96T/48T）打開包裝后請及(ji)時檢(jian)查所有物品是否齊全。

2. 標準(zhun)品(pin)濃度依次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經(jing)過(guo)大量正常(chang)標(biao)(biao)本(ben)檢驗，標(biao)(biao)本(ben)的正常(chang)濃(nong)度(du)值均在(zai)試劑盒提供的檢測范圍內，實(shi)驗過(guo)程(cheng)中直接取(qu)50μL樣(yang)(yang)本(ben)上樣(yang)(yang)即(ji)可(ke)(ke)。當有部分樣(yang)(yang)本(ben)值超過(guo)大標(biao)(biao)準品濃(nong)度(du)時，可(ke)(ke)用(yong)樣(yang)(yang)本(ben)稀(xi)釋(shi)(shi)液(ye)將標(biao)(biao)本(ben)進行適當稀(xi)釋(shi)(shi)后再進行實(shi)驗。

檢測前準備工作：

1.請提前(qian)20分(fen)鐘從(cong)冰(bing)箱中取出試劑(ji)盒，平衡至(zhi)室溫(wen)。

2.從冰(bing)箱中取出的濃(nong)縮(suo)洗滌液可(ke)能有(you)結(jie)晶，屬于正常現象(xiang)；放置(zhi)室溫，輕搖均勻，待結(jie)晶溶解后再配置(zhi)洗滌液。可(ke)將20ml濃(nong)縮(suo)洗滌液用蒸餾水(shui)或去離子水(shui)稀釋(shi)配置(zhi)成400ml工作濃(nong)度的洗滌液，未用完(wan)的放回4℃

3.20×洗滌(di)緩沖液(ye)的稀釋(shi)：蒸餾(liu)水(shui)按1：20稀釋(shi)，即(ji)1份20×洗滌(di)緩沖液(ye)加19份蒸餾(liu)水(shui)。

實驗原理：

大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠α 干擾素(IFN-α )捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠α 干擾素(IFN-α )呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實(shi)驗所(suo)需自備試驗器材：

1.酶標儀（450nm）

2.高(gao)精度(du)加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫(wen)箱

4.蒸餾水或去(qu)離子水

樣本處(chu)理及要求：

1.血清(qing)：將(jiang)收集于血清(qing)分(fen)離(li)管的(de)全(quan)血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然(ran)后(hou)1000×g離(li)心20 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即可，或將(jiang)上清(qing)置于-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免(mian)反復(fu)凍融。

2.血漿：用EDTA或(huo)肝(gan)素作為(wei)抗凝劑采(cai)集(ji)標本，并將標本在采(cai)集(ji)后的30分鐘內于(yu)2-8℃ 1000×g離(li)心(xin)15分鐘，取上(shang)清(qing)即(ji)可檢測，或(huo)將上(shang)清(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避免反(fan)復凍融。

3.組(zu)織(zhi)(zhi)勻漿：用(yong)預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)織(zhi)(zhi)，去(qu)除殘留血液(ye)（勻漿中(zhong)裂解(jie)(jie)的紅(hong)細胞會影響測(ce)量(liang)結果(guo)），稱(cheng)重后將組(zu)織(zhi)(zhi)剪碎。將剪碎的組(zu)織(zhi)(zhi)與對應體積的PBS（一(yi)(yi)般(ban)按1:9的重量(liang)體積比，比如1g的組(zu)織(zhi)(zhi)樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實(shi)驗(yan)需要(yao)適(shi)當(dang)調整(zheng)，并做好(hao)記錄。推薦在PBS中(zhong)加(jia)入(ru)蛋白酶抑制劑）加(jia)入(ru)玻(bo)璃勻漿器中(zhong)，于(yu)冰上充分(fen)研磨。為(wei)了(le)進一(yi)(yi)步裂解(jie)(jie)組(zu)織(zhi)(zhi)細胞，可以對勻漿液(ye)進行超聲破(po)碎，或反(fan)復凍(dong)融(rong)。后將勻漿液(ye)于(yu)5000×g離心5~10分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)檢測(ce)。

4.細胞(bao)培養物上(shang)清(qing)：請1000×g離心20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢(jian)測，或將上(shang)清(qing)置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復(fu)凍融。

5.其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取(qu)上清即(ji)可檢測。

6.樣品(pin)外觀：樣品(pin)應清澈(che)透明，懸(xuan)浮物應離心去除。

7.樣(yang)品保(bao)存：樣(yang)品收集(ji)后若在1周內進行檢(jian)(jian)測的可保(bao)存于4℃，若不能(neng)及時檢(jian)(jian)測，請按一次(ci)使用量分裝，凍存于-20℃（1個月(yue)內檢(jian)(jian)測），或-80℃（6個月(yue)內檢(jian)(jian)測），避免反(fan)復凍融，標本溶血(xue)會影響后檢(jian)(jian)測結果，因(yin)此(ci)溶血(xue)標本不宜進行此(ci)項(xiang)檢(jian)(jian)測。

注意事項：

1.嚴(yan)格按照規(gui)定的時間和溫度進行(xing)溫育(yu)以保證準確結果。所有(you)試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷(leng)藏保存試劑。

2.洗板不(bu)正確(que)(que)可(ke)以導致(zhi)不(bu)準確(que)(que)的結(jie)果。在加(jia)入底物(wu)前確(que)(que)保盡量吸干(gan)孔(kong)內液體。溫育過程中不(bu)要讓微(wei)孔(kong)干(gan)燥掉。

3.消除板底(di)殘留(liu)的液(ye)體和手(shou)指印，否則影響(xiang)OD值。

4.底物顯色(se)液應呈無色(se)或很淺的顏色(se)，已經(jing)變藍的底物液不(bu)能(neng)使用。

5.避免(mian)(mian)試劑和標本的交叉污(wu)染以免(mian)(mian)造成錯誤結果。

6.在儲存和溫(wen)育(yu)時避免(mian)強光直接(jie)照射。

7.平(ping)衡至室(shi)溫后再打(da)開密封袋(dai)以防水(shui)滴凝(ning)聚(ju)在冷板條上。

8.任何(he)反(fan)應試劑(ji)(ji)不能接觸漂白溶(rong)劑(ji)(ji)或漂白溶(rong)劑(ji)(ji)所散發的強烈氣體。任何(he)漂白成分都會破壞試劑(ji)(ji)盒(he)中反(fan)應試劑(ji)(ji)的生(sheng)物活性。

9.不能(neng)使用過期產品(pin)。

10.如果可能傳播(bo)疾病，所有的樣品都應管(guan)理好，按照(zhao)規定(ding)的程(cheng)序處理樣品和檢測裝置。

操作(zuo)步(bu)驟：

1．從室溫平衡60min后的鋁箔袋(dai)(dai)中(zhong)取出所需(xu)板(ban)(ban)條，剩余板(ban)(ban)條用自(zi)封袋(dai)(dai)密封放回(hui)4℃。

2．設置標(biao)準品孔和樣本孔，標(biao)準品孔各(ge)加不同濃度的標(biao)準品50μL。

3．樣本(ben)(ben)孔(kong)中a加入待(dai)測樣本(ben)(ben)50μL；空白孔(kong)不加。

4．除空白孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣(yang)本孔(kong)中每孔(kong)加入(ru)辣(la)根(gen)過(guo)氧化物酶（HRP）標記(ji)的檢(jian)測(ce)抗(kang)體100μL，用封板膜(mo)封住反(fan)應孔(kong)，37℃水(shui)浴(yu)鍋或恒溫箱溫育60min。

5．棄(qi)去液體，吸水紙上拍(pai)干，每孔加(jia)滿洗滌液（350μL），靜置(zhi)1min，甩(shuai)去洗滌液，吸水紙上拍(pai)干，如此(ci)重復洗板5次（也可用洗板機(ji)洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵(fu)育15min。

7．每孔加(jia)入終止(zhi)液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值(zhi)。

實驗結果(guo)計(ji)算：

繪(hui)制(zhi)標(biao)準曲(qu)線(xian)(xian)：在Excel工作(zuo)表(biao)中，以(yi)標(biao)準品濃度作(zuo)橫坐標(biao)，對(dui)應OD值作(zuo)縱坐標(biao)，繪(hui)制(zhi)出標(biao)準品線(xian)(xian)性回歸(gui)曲(qu)線(xian)(xian)，按曲(qu)線(xian)(xian)方程計算各(ge)樣本濃度值。

（此圖(tu)僅供參考）

性能：

1. 檢測范圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度：低(di)檢(jian)測濃度小于1.0 pg/mL。

3.特異性：不與其它可溶(rong)性結構類(lei)似物交叉反應(ying)。

4.重(zhong)復(fu)性：板(ban)內變(bian)異系數小于10% ，板(ban)間變(bian)異系數小于15% 。

技術(shu)小提示：

1.當混合或重(zhong)溶蛋白溶液時(shi)，盡量避免起沫。

2.為了(le)避免交叉(cha)感染，配置(zhi)不(bu)(bu)同濃(nong)度標準品、上樣、加不(bu)(bu)同試(shi)劑都需(xu)要更換槍頭。另外不(bu)(bu)同試(shi)劑請分(fen)別使用(yong)不(bu)(bu)同的移液槽。

3.每(mei)次孵育時(shi)，請正(zheng)確使用封板膠可保(bao)證(zheng)結果的準確性。

4.混合后(hou)的(de)顯(xian)色底物(wu)在上板(ban)前應為無色，請避(bi)光保存；假如(ru)微(wei)孔板(ban)后(hou)，將由物(wu)色變成不同深度的(de)藍(lan)色。

5.終止(zhi)液上(shang)板順(shun)序應(ying)同顯色底物上(shang)板順(shun)序一致；加入終止(zhi)液后(hou)，孔(kong)內顏色由(you)藍(lan)變黃；若孔(kong)內有(you)綠(lv)色，則表明(ming)孔(kong)內液體未混勻(yun)；請充分混合。

大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒說明：

1.由于(yu)現有條(tiao)件及科學技(ji)術水平(ping)尚(shang)不能對所有供貨商(shang)提供的所有原(yuan)料進行全面的鑒(jian)定與(yu)分析(xi)，本產品可能存在一定的質(zhi)量技(ji)術風險。

2.實(shi)驗結(jie)果與試劑的有效性、實(shi)驗者(zhe)的相關操作以(yi)及當(dang)時(shi)的實(shi)驗環境密切相關，請(qing)務必(bi)準備充(chong)足的標(biao)本(ben)備份。

3.不同批(pi)次的同一(yi)產品可能會有少(shao)許差別，如(ru)：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明(ming)書進行實(shi)驗操作，網站電(dian)子版說明(ming)書僅(jin)作參考。

4.只(zhi)有全部使用本試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)配套試(shi)劑(ji)(ji)才(cai)能(neng)保證檢測效果，不能(neng)混用其他制造商的(de)(de)(de)產品(pin)。只(zhi)有嚴格遵(zun)守本試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)的(de)(de)(de)實驗說明才(cai)會(hui)得(de)到的(de)(de)(de)檢測結果。