人心(xin)肌(ji)營養素1(CT-1)試劑(ji)盒(he)

本試劑盒僅供(gong)體外研究使(shi)用，不用于臨床診(zhen)斷

本試劑盒用于體(ti)外定量(liang)檢(jian)測(ce)血(xue)清(qing)、血(xue)漿、組織(zhi)勻(yun)漿及相關液體(ti)樣本中人心(xin)肌營養素(su)1(CT-1)的含量(liang)。

有(you)效期：6個月

保(bao)存(cun)條件：2-8℃

試劑(ji)盒組成(cheng)：

備注：

1.（96T/48T）打開包(bao)裝后(hou)請及時檢查所有物(wu)品是否齊全。

2. 標(biao)準品(pin)濃度依次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過(guo)大量正常標(biao)本檢驗，標(biao)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過(guo)程中直接取50μL樣本上樣即可(ke)。當有部(bu)分樣本值超過(guo)大標(biao)準品濃度時，可(ke)用樣本稀(xi)釋液將標(biao)本進行適當稀(xi)釋后(hou)再進行實驗。

檢測前(qian)準備工作：

1.請提(ti)前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫(wen)。

2.從冰箱中取出(chu)的濃(nong)(nong)縮洗(xi)滌液(ye)可(ke)(ke)能有(you)結晶，屬于(yu)正常現象；放置室溫，輕搖均勻(yun)，待結晶溶解后(hou)再配置洗(xi)滌液(ye)。可(ke)(ke)將(jiang)20ml濃(nong)(nong)縮洗(xi)滌液(ye)用蒸餾水或去離子水稀釋配置成(cheng)400ml工作濃(nong)(nong)度的洗(xi)滌液(ye)，未用完的放回(hui)4℃

3.20×洗滌緩沖(chong)(chong)液的(de)稀釋(shi)：蒸餾水按(an)1：20稀釋(shi)，即(ji)1份20×洗滌緩沖(chong)(chong)液加(jia)19份蒸餾水。

實驗原理：

人心肌營養素1(CT-1)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人心肌營養素1(CT-1)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心肌營養素1(CT-1)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗所(suo)需自(zi)備試驗器材：

1.酶(mei)標儀（450nm）

2.高精(jing)度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾(liu)水(shui)或去離子水(shui)

樣本處理及要求：

1.血(xue)清(qing)(qing)：將收集于血(xue)清(qing)(qing)分(fen)離(li)管的全血(xue)標本在室溫放置2小(xiao)時或(huo)(huo)4℃過(guo)夜，然后1000×g離(li)心20 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)(qing)即可，或(huo)(huo)將上清(qing)(qing)置于-20℃或(huo)(huo)-80℃保存(cun)，但應避免反復凍融。

2.血漿(jiang)：用EDTA或(huo)肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nei)于(yu)2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將上清(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反(fan)復凍融。

3.組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)：用預(yu)冷的(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除殘留血液（勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)中(zhong)(zhong)裂(lie)解的(de)(de)紅細(xi)胞(bao)會影響測量結(jie)果），稱重后(hou)將(jiang)組(zu)織(zhi)剪碎。將(jiang)剪碎的(de)(de)組(zu)織(zhi)與(yu)對應體(ti)積(ji)的(de)(de)PBS（一(yi)般按1:9的(de)(de)重量體(ti)積(ji)比(bi)，比(bi)如1g的(de)(de)組(zu)織(zhi)樣品對應9mL的(de)(de)PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根據實驗(yan)需(xu)要適當調(diao)整，并(bing)做好(hao)記(ji)錄。推(tui)薦在PBS中(zhong)(zhong)加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)器中(zhong)(zhong)，于(yu)冰上充(chong)分研(yan)磨。為了進一(yi)步裂(lie)解組(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)，可(ke)以對勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)液進行超聲破碎，或反復凍(dong)融。后(hou)將(jiang)勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)(jiang)液于(yu)5000×g離(li)心5~10分鐘(zhong)，取上清檢測。

4.細胞培養(yang)物上清：請1000×g離心20分(fen)鐘，取上清即可(ke)檢測，或(huo)將上清置于-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反復凍(dong)融。

5.其它生物標本：1000×g離心20分鐘(zhong)，取上清即可(ke)檢測。

6.樣品(pin)外觀：樣品(pin)應清澈透(tou)明(ming)，懸浮物(wu)應離心去除。

7.樣品(pin)保存(cun)：樣品(pin)收集后若(ruo)在1周內(nei)進行(xing)檢(jian)測(ce)(ce)的可保存(cun)于4℃，若(ruo)不能及時檢(jian)測(ce)(ce)，請按一次使用量分裝，凍存(cun)于-20℃（1個月(yue)內(nei)檢(jian)測(ce)(ce)），或-80℃（6個月(yue)內(nei)檢(jian)測(ce)(ce)），避(bi)免反復凍融，標(biao)本溶血會(hui)影響后檢(jian)測(ce)(ce)結果(guo)，因此(ci)溶血標(biao)本不宜進行(xing)此(ci)項檢(jian)測(ce)(ce)。

注意(yi)事(shi)項：

1.嚴格按照規(gui)定的(de)時間(jian)和溫度(du)進行溫育以保(bao)證準(zhun)確結果。所有試劑(ji)都必須(xu)在使(shi)用前(qian)達到室溫20-25℃。使(shi)用后立(li)即冷藏保(bao)存(cun)試劑(ji)。

2.洗板(ban)不(bu)正確(que)可以導致(zhi)不(bu)準(zhun)確(que)的結(jie)果。在加入底物前確(que)保盡量吸干(gan)孔內液(ye)體。溫育過(guo)程中不(bu)要讓微(wei)孔干(gan)燥掉。

3.消除板底(di)殘留(liu)的液(ye)體和手指印(yin)，否則(ze)影(ying)響OD值。

4.底物顯色(se)(se)液應呈無色(se)(se)或很(hen)淺的顏色(se)(se)，已經變藍的底物液不能(neng)使用。

5.避免(mian)試劑(ji)和標(biao)本的交叉污染以免(mian)造成錯誤(wu)結果(guo)。

6.在儲存和(he)溫育時避免強光(guang)直(zhi)接照(zhao)射。

7.平衡至室溫后再打開密(mi)封袋以防水滴凝(ning)聚(ju)在冷板條上。

8.任何反應(ying)試(shi)劑(ji)不能(neng)接觸(chu)漂(piao)白溶劑(ji)或漂(piao)白溶劑(ji)所散發的(de)強(qiang)烈氣體(ti)。任何漂(piao)白成分(fen)都會破(po)壞試(shi)劑(ji)盒(he)中反應(ying)試(shi)劑(ji)的(de)生物活性。

9.不能使用過期產品。

10.如果可能傳播(bo)疾病，所有的(de)樣品(pin)都應管(guan)理好，按(an)照規(gui)定的(de)程序(xu)處理樣品(pin)和檢測裝(zhuang)置。

操作步(bu)驟：

1．從室溫平衡60min后(hou)的鋁(lv)箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封(feng)袋密封(feng)放回4℃。

2．設置標準品(pin)(pin)孔和樣(yang)本(ben)孔，標準品(pin)(pin)孔各加不同濃度的(de)標準品(pin)(pin)50μL。

3．樣(yang)本孔(kong)中a加入待測樣(yang)本50μL；空白孔(kong)不加。

4．除空白孔(kong)(kong)外，標準品孔(kong)(kong)和樣(yang)本孔(kong)(kong)中每孔(kong)(kong)加入辣根過氧(yang)化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反應孔(kong)(kong)，37℃水浴(yu)鍋或(huo)恒溫(wen)箱溫(wen)育(yu)60min。

5．棄去液體(ti)，吸(xi)水(shui)紙上拍(pai)(pai)干，每孔加(jia)滿(man)洗滌(di)液（350μL），靜置1min，甩(shuai)去洗滌(di)液，吸(xi)水(shui)紙上拍(pai)(pai)干，如此重(zhong)復洗板(ban)5次（也(ye)可用(yong)洗板(ban)機洗板(ban)）。

6．每孔加(jia)入底物A、B各50μL，37℃避光孵(fu)育15min。

7．每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實(shi)驗結果計算：

繪制標(biao)準曲線(xian)：在Excel工作表(biao)中，以(yi)標(biao)準品(pin)濃度作橫坐(zuo)標(biao)，對應OD值(zhi)作縱坐(zuo)標(biao)，繪制出標(biao)準品(pin)線(xian)性回歸(gui)曲線(xian)，按曲線(xian)方程計算各(ge)樣本濃度值(zhi)。

（此圖僅供參考(kao)）

性(xing)能：

1. 檢測范圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏(min)度(du)：低檢(jian)測(ce)濃度(du)小于(yu)1.0 pg/mL。

3.特(te)異性(xing)：不與其它可溶性(xing)結構類似物交(jiao)叉反(fan)應。

4.重復(fu)性：板內(nei)變異系數小于(yu)10% ，板間變異系數小于(yu)15% 。

技術小提示：

1.當混合或重溶(rong)蛋白溶(rong)液(ye)時(shi)，盡量避免起沫。

2.人心肌營養素1(CT-1)試劑盒為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

3.每次孵育時，請正(zheng)確使用封(feng)板膠可保證結果的(de)準確性。

4.混合后的顯色(se)底物在上板(ban)前應為無色(se)，請(qing)避光保存；假如微(wei)孔板(ban)后，將由物色(se)變成不同深(shen)度的藍色(se)。

5.終止液上(shang)板(ban)順序(xu)應同顯色(se)(se)底(di)物上(shang)板(ban)順序(xu)一致；加入終止液后，孔(kong)內(nei)顏色(se)(se)由(you)藍變黃(huang)；若孔(kong)內(nei)有綠(lv)色(se)(se)，則表(biao)明孔(kong)內(nei)液體(ti)未混勻；請充分混合。

說明(ming)：

1.由于現(xian)有(you)條(tiao)件及科學技(ji)(ji)術水平(ping)尚不(bu)能(neng)(neng)對(dui)所有(you)供貨商提供的所有(you)原料進行全面的鑒(jian)定與(yu)分析，本產(chan)品可能(neng)(neng)存(cun)在一定的質量技(ji)(ji)術風險。

2.實驗結(jie)果(guo)與試劑的(de)有效性、實驗者的(de)相關(guan)操作以及當時的(de)實驗環境密(mi)切(qie)相關(guan)，請務必準備(bei)充足的(de)標本備(bei)份。

3.不(bu)同批次的(de)同一產品(pin)可能(neng)會(hui)有少許差別，如(ru)：檢測限、靈敏度以及顯色(se)時間等，請(qing)依據試劑盒內(nei)說明書進行(xing)實驗(yan)操作(zuo)，網(wang)站電(dian)子(zi)版說明書僅(jin)作(zuo)參考。

4.只有全部(bu)使(shi)用本試劑盒配套試劑才能保(bao)證檢測(ce)效果(guo)(guo)，不(bu)能混(hun)用其他制造商的產品。只有嚴格(ge)遵守本試劑盒的實(shi)驗說明才會得到的檢測(ce)結果(guo)(guo)。