牛Adropin蛋白(Adropin)試劑盒

本(ben)試劑盒僅供體(ti)外研(yan)究使用，不(bu)用于臨床診斷

本試(shi)劑盒用于體外定量(liang)(liang)檢測(ce)血清、血漿(jiang)、組織勻漿(jiang)及相關液體樣(yang)本中牛Adropin蛋(dan)白(Adropin）的含量(liang)(liang)。

有(you)效期：6個(ge)月

保(bao)存條件：2-8℃

試(shi)劑盒組成：

備注：

1.（96T/48T）打開包裝(zhuang)后(hou)請及時檢查所有物品是否齊全(quan)。

2. 標(biao)準品濃(nong)度依次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經(jing)過大量正(zheng)(zheng)常(chang)標本(ben)檢(jian)(jian)驗(yan)，標本(ben)的(de)正(zheng)(zheng)常(chang)濃度(du)(du)值(zhi)均在(zai)試劑盒提供的(de)檢(jian)(jian)測范圍內(nei)，實驗(yan)過程(cheng)中直接(jie)取50μL樣本(ben)上樣即可(ke)。當有(you)部分(fen)樣本(ben)值(zhi)超過大標準品濃度(du)(du)時，可(ke)用(yong)樣本(ben)稀釋液將標本(ben)進(jin)行適當稀釋后再進(jin)行實驗(yan)。

檢測前準備(bei)工作(zuo)：

1.請提前(qian)20分鐘從冰箱(xiang)中取(qu)出試(shi)劑盒，平(ping)衡(heng)至室溫。

2.從冰箱中取出的濃(nong)(nong)縮(suo)(suo)洗滌(di)液(ye)(ye)可(ke)能有結(jie)晶，屬(shu)于(yu)正常現(xian)象；放置(zhi)(zhi)室溫(wen)，輕搖(yao)均勻，待(dai)結(jie)晶溶解后再配(pei)置(zhi)(zhi)洗滌(di)液(ye)(ye)。可(ke)將(jiang)20ml濃(nong)(nong)縮(suo)(suo)洗滌(di)液(ye)(ye)用(yong)蒸餾水(shui)或去離子水(shui)稀釋配(pei)置(zhi)(zhi)成(cheng)400ml工作濃(nong)(nong)度的洗滌(di)液(ye)(ye)，未用(yong)完的放回4℃

3.20×洗滌緩沖液的(de)稀(xi)釋：蒸(zheng)(zheng)餾(liu)(liu)水按(an)1：20稀(xi)釋，即1份20×洗滌緩沖液加(jia)19份蒸(zheng)(zheng)餾(liu)(liu)水。

實驗原理：

牛Adropin蛋白(Adropin)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被牛Adropin蛋白(Adropin）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛Adropin蛋白(Adropin）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗所需自備(bei)試驗器材：

1.酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2.高精度(du)加樣器(qi)及槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水(shui)或去離子水(shui)

樣(yang)本處理及要求：

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1.血(xue)清：將收(shou)集于血(xue)清分離管(guan)的全血(xue)標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然(ran)后1000×g離心20 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)(shang)清即可，或將上(shang)(shang)清置于-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反復凍融。

2.血漿：用EDTA或肝(gan)素作為抗(kang)凝劑采集(ji)(ji)標本，并(bing)將標本在采集(ji)(ji)后(hou)的30分鐘內(nei)于(yu)2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清(qing)即可檢(jian)測，或將上清(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反(fan)復凍(dong)融(rong)。

3.組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)：用預冷的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)，去除殘留(liu)血液(ye)(ye)（勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)中裂(lie)解的(de)紅細胞(bao)會影響(xiang)測(ce)(ce)量(liang)結果），稱重后(hou)將(jiang)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)剪碎。將(jiang)剪碎的(de)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)與對(dui)應體(ti)積(ji)的(de)PBS（一(yi)般按1:9的(de)重量(liang)體(ti)積(ji)比，比如1g的(de)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)樣品(pin)對(dui)應9mL的(de)PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根據實(shi)驗需(xu)要(yao)適當調整(zheng)，并做好記錄。推薦在PBS中加(jia)入蛋(dan)白酶抑(yi)制劑）加(jia)入玻(bo)璃(li)勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)器(qi)中，于冰(bing)上充分研磨。為了進一(yi)步裂(lie)解組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)細胞(bao)，可(ke)以對(dui)勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)(ye)進行超聲(sheng)破(po)碎，或反復凍融(rong)。后(hou)將(jiang)勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)(ye)于5000×g離心(xin)5~10分鐘，取上清(qing)檢測(ce)(ce)。

4.細(xi)胞培養物上清(qing)：請1000×g離心20分鐘，取上清(qing)即可檢測(ce)，或(huo)將上清(qing)置于(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避免反復凍融。

5.其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上(shang)清即可檢測。

6.樣(yang)品外觀：樣(yang)品應(ying)清澈透明，懸浮物(wu)應(ying)離心去(qu)除。

7.樣品(pin)保(bao)存：樣品(pin)收集(ji)后(hou)若在(zai)1周(zhou)內進行檢(jian)測(ce)的(de)可保(bao)存于4℃，若不能及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按一次使用量分裝，凍(dong)存于-20℃（1個月內檢(jian)測(ce)），或(huo)-80℃（6個月內檢(jian)測(ce)），避免反(fan)復凍(dong)融，標本溶(rong)(rong)血會影響后(hou)檢(jian)測(ce)結(jie)果(guo)，因此(ci)溶(rong)(rong)血標本不宜進行此(ci)項檢(jian)測(ce)。

注意事項：

1.嚴格按(an)照規(gui)定的時間和溫(wen)度(du)進行溫(wen)育(yu)以保(bao)證準確(que)結果。所有試(shi)劑都必須在使用(yong)前達到室溫(wen)20-25℃。使用(yong)后(hou)立即冷藏保(bao)存試(shi)劑。

2.洗(xi)板不(bu)正確可以導致不(bu)準確的結果。在加(jia)入底物前確保盡(jin)量吸(xi)干孔(kong)內液體。溫育過程中(zhong)不(bu)要讓微孔(kong)干燥(zao)掉。

3.消除板底殘留的液體和手指印，否則(ze)影響OD值(zhi)。

4.底(di)物顯色(se)液(ye)應(ying)呈無色(se)或很淺的(de)顏色(se)，已經變藍(lan)的(de)底(di)物液(ye)不能使用。

5.避(bi)免(mian)試劑和標本的交叉污(wu)染以免(mian)造成錯誤結(jie)果。

6.在(zai)儲存和(he)溫育時避免強光(guang)直接照射。

7.平衡至室溫后再打(da)開密封袋以防水滴凝聚在(zai)冷板條(tiao)上(shang)。

8.任何反應試(shi)(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)接(jie)觸漂(piao)(piao)白溶(rong)劑(ji)或漂(piao)(piao)白溶(rong)劑(ji)所(suo)散(san)發(fa)的強(qiang)烈氣體。任何漂(piao)(piao)白成分都會(hui)破壞試(shi)(shi)劑(ji)盒(he)中(zhong)反應試(shi)(shi)劑(ji)的生物活(huo)性。

9.不能使用(yong)過期產品。

10.如果(guo)可能傳播疾病，所有(you)的樣品(pin)都應(ying)管理好，按照規定的程序處理樣品(pin)和檢測裝置。

操作步驟：

1．從室溫平衡(heng)60min后的鋁箔(bo)袋(dai)中取出所需板條(tiao)，剩余板條(tiao)用自(zi)封袋(dai)密封放(fang)回4℃。

2．設置(zhi)標準品孔(kong)和樣本孔(kong)，標準品孔(kong)各(ge)加不同濃(nong)度的標準品50μL。

3．樣本(ben)孔(kong)中a加入待測樣本(ben)50μL；空白孔(kong)不加。

4．除(chu)空白(bai)孔(kong)外(wai)，標準(zhun)品孔(kong)和樣本孔(kong)中每孔(kong)加入辣根(gen)過(guo)氧化物酶（HRP）標記的檢測(ce)抗體100μL，用封板膜封住反應孔(kong)，37℃水(shui)浴鍋或恒(heng)溫箱溫育60min。

5．棄去(qu)液(ye)體，吸(xi)水紙上(shang)拍干，每(mei)孔加滿洗滌液(ye)（350μL），靜(jing)置(zhi)1min，甩去(qu)洗滌液(ye)，吸(xi)水紙上(shang)拍干，如此重復洗板(ban)5次（也可(ke)用洗板(ban)機(ji)洗板(ban)）。

6．每孔加(jia)入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7．每孔加入終止液(ye)50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值(zhi)。

實驗結果計算：

繪(hui)制(zhi)標(biao)準曲線：在Excel工作表中，以(yi)標(biao)準品濃度作橫坐(zuo)標(biao)，對應OD值作縱坐(zuo)標(biao)，繪(hui)制(zhi)出標(biao)準品線性回歸曲線，按(an)曲線方程計(ji)算(suan)各樣本濃度值。

（此圖僅供參考）

性(xing)能：

1. 檢(jian)測范(fan)圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度(du)：低檢測濃度(du)小于1.0 pg/mL。

3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應(ying)。

4.重復性(xing)：板內變異系(xi)數小于10% ，板間變異系(xi)數小于15% 。

技術小提(ti)示：

1.當混合或重溶(rong)蛋白(bai)溶(rong)液(ye)時，盡量避免起沫。

2.為了避免交叉感染，配置(zhi)不(bu)同(tong)濃度標(biao)準品、上樣、加不(bu)同(tong)試(shi)劑(ji)都需要(yao)更換槍頭。另外不(bu)同(tong)試(shi)劑(ji)請(qing)分別使用不(bu)同(tong)的(de)移液槽。

3.每次牛Adropin蛋白(Adropin)試劑盒孵育時，請正確使用封板膠可保證結果的準確性。

4.混(hun)合后的(de)顯色底物(wu)在上(shang)板前應為(wei)無色，請(qing)避(bi)光保存；假(jia)如微孔板后，將由物(wu)色變成不同深度的(de)藍色。

5.終止(zhi)液(ye)上板(ban)順(shun)序(xu)應同顯色(se)(se)底(di)物上板(ban)順(shun)序(xu)一致；加(jia)入終止(zhi)液(ye)后，孔(kong)內顏色(se)(se)由藍(lan)變黃；若孔(kong)內有綠色(se)(se)，則表明(ming)孔(kong)內液(ye)體未(wei)混勻(yun)；請充(chong)分混合(he)。

說明：

1.由于現有條件及科學(xue)技(ji)術水平(ping)尚不能對(dui)所有供(gong)貨商提供(gong)的(de)所有原料進(jin)行全面的(de)鑒定與分析，本產品可(ke)能存在一定的(de)質量技(ji)術風險。

2.終的(de)實(shi)驗(yan)結(jie)果與(yu)試劑(ji)的(de)有效(xiao)性、實(shi)驗(yan)者的(de)相(xiang)關操作(zuo)以及當時的(de)實(shi)驗(yan)環境密切(qie)相(xiang)關，請務必(bi)準備充足的(de)標本備份。

3.不同批(pi)次的同一產品可(ke)能會有少許差別，如：檢測(ce)限、靈敏度以及顯色時間等(deng)，請依據試劑盒(he)內說(shuo)(shuo)明(ming)書進行實(shi)驗(yan)操作，網(wang)站電子版(ban)說(shuo)(shuo)明(ming)書僅(jin)作參考。

4.只有(you)全部使用本試劑盒(he)配套試劑才能保(bao)證檢測(ce)效果(guo)，不能混用其他制造商的產品(pin)。只有(you)嚴格遵守本試劑盒(he)的實驗說明(ming)才會得到檢測(ce)結(jie)果(guo)。