豬腺苷激酶(ADK)試劑盒

本試劑盒(he)僅供體外(wai)研究使用，不用于臨床診斷

本試劑(ji)盒(he)用于體外(wai)定(ding)量檢測血(xue)清、血(xue)漿、組(zu)織勻漿及(ji)相關液(ye)體樣本中豬腺苷激酶(ADK)的含(han)量。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

試劑盒組成：

備注：

1.（96T/48T）打開包裝后請及(ji)時檢查(cha)所有(you)物品是否齊全。

2. 標準品濃(nong)度依(yi)次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過(guo)大量正常標本(ben)(ben)檢驗(yan)，標本(ben)(ben)的(de)正常濃度值(zhi)均在(zai)試劑盒提供的(de)檢測范圍內(nei)，實(shi)驗(yan)過(guo)程中(zhong)直接取(qu)50μL樣(yang)(yang)本(ben)(ben)上樣(yang)(yang)即可。當有部分樣(yang)(yang)本(ben)(ben)值(zhi)超(chao)過(guo)大標準品濃度時(shi)，可用(yong)樣(yang)(yang)本(ben)(ben)稀釋(shi)液將標本(ben)(ben)進行適當稀釋(shi)后再進行實(shi)驗(yan)。

檢測前準備工作：

1.請提前(qian)20分鐘從冰箱(xiang)中取出試(shi)劑盒，平(ping)衡至室溫。

2.從冰箱(xiang)中取出的(de)濃縮(suo)洗(xi)(xi)滌液可能有結晶，屬于正常現象(xiang)；放(fang)置(zhi)室溫，輕搖(yao)均勻(yun)，待(dai)結晶溶(rong)解(jie)后再配置(zhi)洗(xi)(xi)滌液。可將20ml濃縮(suo)洗(xi)(xi)滌液用(yong)蒸餾水或去(qu)離子水稀釋(shi)配置(zhi)成400ml工(gong)作濃度的(de)洗(xi)(xi)滌液，未用(yong)完(wan)的(de)放(fang)回4℃

3.20×洗(xi)滌緩沖液(ye)的稀釋：蒸餾水按(an)1：20稀釋，即1份(fen)20×洗(xi)滌緩沖液(ye)加(jia)19份(fen)蒸餾水。

實驗原理：

豬腺苷激酶(ADK)試劑盒采用(yong)(yong)雙抗(kang)體一步夾(jia)心法酶(mei)聯免疫(yi)吸(xi)附(fu)試驗（ELISA）。往(wang)預先包(bao)被豬(zhu)腺苷(gan)激(ji)酶(mei)(ADK)捕獲抗(kang)體的(de)包(bao)被微孔中，依(yi)次加(jia)入標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢測抗(kang)體，經過(guo)溫育并洗(xi)滌。用(yong)(yong)底物TMB顯色(se)(se)，TMB在過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)的(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍色(se)(se)，并在酸(suan)的(de)作用(yong)(yong)下轉(zhuan)化(hua)成終(zhong)的(de)黃色(se)(se)。顏(yan)色(se)(se)的(de)深淺和樣(yang)品中的(de)豬(zhu)腺苷(gan)激(ji)酶(mei)(ADK)呈正相關。用(yong)(yong)酶(mei)標(biao)儀在450nm 波長下測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值），計算(suan)樣(yang)品濃度(du)。

實驗所需自備試驗器材：

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水或去離子水

樣本處理及要求：

1.血(xue)清(qing)：將(jiang)(jiang)收集于血(xue)清(qing)分(fen)離(li)管的(de)全血(xue)標本在室(shi)溫放置2小時或(huo)4℃過(guo)夜(ye)，然后1000×g離(li)心20 分(fen)鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)即可，或(huo)將(jiang)(jiang)上(shang)清(qing)置于-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反復凍融。

2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑(ji)采集標本，并(bing)將標本在采集后的30分(fen)鐘內(nei)于(yu)2-8℃ 1000×g離心15分(fen)鐘，取上(shang)(shang)清即可(ke)檢(jian)測(ce)，或將上(shang)(shang)清置于(yu)-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免(mian)反復凍融。

3.組(zu)織(zhi)勻(yun)(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)：用預(yu)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除殘留血液(ye)（勻(yun)(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)中裂(lie)解的紅細胞會影響測(ce)(ce)量(liang)結(jie)果），稱(cheng)重(zhong)后將(jiang)組(zu)織(zhi)剪碎(sui)(sui)(sui)。將(jiang)剪碎(sui)(sui)(sui)的組(zu)織(zhi)與(yu)對(dui)應(ying)體積(ji)的PBS（一(yi)般按1:9的重(zhong)量(liang)體積(ji)比，比如1g的組(zu)織(zhi)樣品對(dui)應(ying)9mL的PBS，具體體積(ji)可根(gen)據實驗(yan)需要適(shi)當調整，并做好(hao)記錄。推薦(jian)在PBS中加入蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑）加入玻(bo)璃勻(yun)(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)器(qi)中，于冰上充分研磨。為了進一(yi)步裂(lie)解組(zu)織(zhi)細胞，可以對(dui)勻(yun)(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)進行超聲破碎(sui)(sui)(sui)，或反復凍融。后將(jiang)勻(yun)(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)于5000×g離心5~10分鐘，取上清(qing)檢測(ce)(ce)。

4.細胞培養物上清(qing)(qing)：請1000×g離心(xin)20分鐘(zhong)，取上清(qing)(qing)即可檢測(ce)，或(huo)將上清(qing)(qing)置于(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反復凍融。

5.其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

6.樣品外觀：樣品應(ying)清澈透(tou)明，懸(xuan)浮物應(ying)離心(xin)去除。

7.樣品(pin)保(bao)存：樣品(pin)收集后若在1周內(nei)進(jin)行檢(jian)(jian)測(ce)(ce)的可保(bao)存于(yu)4℃，若不(bu)能(neng)及時檢(jian)(jian)測(ce)(ce)，請按一(yi)次使用量分裝，凍(dong)存于(yu)-20℃（1個(ge)(ge)月內(nei)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)），或-80℃（6個(ge)(ge)月內(nei)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)），避免(mian)反復凍(dong)融，標本溶(rong)血會影響后檢(jian)(jian)測(ce)(ce)結果，因此溶(rong)血標本不(bu)宜進(jin)行此項檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。

注意事項：

1.嚴格按照規(gui)定的時間和溫度進行溫育(yu)以保證準確結果。所有(you)試劑(ji)都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷(leng)藏保存試劑(ji)。

2.洗(xi)板不(bu)(bu)正確(que)可以導致(zhi)不(bu)(bu)準確(que)的結(jie)果(guo)。在加入底物前確(que)保盡量吸干孔內液體。溫育過程(cheng)中不(bu)(bu)要讓微孔干燥(zao)掉。

3.消除板底殘留的液(ye)體和手(shou)指印，否則影響OD值。

4.底(di)(di)物顯(xian)色(se)液應呈無色(se)或很淺的(de)顏色(se)，已經變(bian)藍(lan)的(de)底(di)(di)物液不能使用。

5.避免試劑和標本的交叉污染以(yi)免造成(cheng)錯誤結果。

6.在儲(chu)存和溫(wen)育時避(bi)免強光直(zhi)接照射。

7.平(ping)衡至室溫后再打開密封(feng)袋以(yi)防水(shui)滴凝聚在冷板(ban)條上。

8.任何反應試劑不(bu)能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物(wu)活性。

9.不能(neng)使用(yong)過期產(chan)品。

10.如果可能傳播疾病(bing)，所有的(de)樣品都應管理好(hao)，按照規(gui)定(ding)的(de)程(cheng)序處(chu)理樣品和檢(jian)測裝置。

操作步驟：

1．從室溫平衡60min后的(de)鋁箔袋(dai)中(zhong)取出所需板條，剩余板條用自封袋(dai)密封放回(hui)4℃。

2．設置(zhi)標準品孔和樣本孔，標準品孔各(ge)加不(bu)同濃度的標準品50μL。

3．樣本孔(kong)中a加入待(dai)測樣本50μL；空白孔(kong)不(bu)加。

4．除空白孔外(wai)，標(biao)準品孔和(he)樣本孔中每(mei)孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biao)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5．棄去液(ye)(ye)體，吸水紙上拍(pai)干，每孔加(jia)滿洗滌(di)液(ye)(ye)（350μL），靜置1min，甩去洗滌(di)液(ye)(ye)，吸水紙上拍(pai)干，如此重復(fu)洗板5次（也可用洗板機(ji)洗板）。

6．每孔加入底物(wu)A、B各50μL，37℃避光孵育(yu)15min。

7．每孔加入終(zhong)止(zhi)液50μL，15min內，在450nm波長(chang)處測定各孔的OD值。

實驗結果計算：

繪(hui)制(zhi)標(biao)準曲(qu)(qu)線：在Excel工作(zuo)(zuo)表(biao)中(zhong)，以標(biao)準品濃(nong)度(du)作(zuo)(zuo)橫坐(zuo)標(biao)，對應OD值(zhi)作(zuo)(zuo)縱坐(zuo)標(biao)，繪(hui)制(zhi)出標(biao)準品線性回歸曲(qu)(qu)線，按曲(qu)(qu)線方程計算各樣本濃(nong)度(du)值(zhi)。

（此圖僅供參考）

性能：

1. 檢測范圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度：低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

3.特異性(xing)：不(bu)與其它可溶性(xing)結(jie)構類似物交叉反(fan)應。

4.重復性(xing)：板(ban)內變(bian)異系(xi)數小于(yu)10% ，板(ban)間(jian)變(bian)異系(xi)數小于(yu)15% 。

技術小提示：

1.當混合或重溶(rong)蛋(dan)白溶(rong)液時，盡(jin)量避免起沫。

2.為了避免交(jiao)叉感(gan)染，配置(zhi)不同濃度(du)標準品(pin)、上樣(yang)、加(jia)不同試劑(ji)都需要(yao)更換槍頭。另外不同試劑(ji)請(qing)分別(bie)使用不同的移液(ye)槽。

3.每次孵(fu)育時，請正(zheng)確使用封板(ban)膠可保(bao)證(zheng)結果的準(zhun)確性。

4.混(hun)合后的顯(xian)色(se)底物(wu)在(zai)上板前應為無色(se)，請避光(guang)保存(cun)；假(jia)如(ru)微孔板后，將由物(wu)色(se)變成(cheng)不同深度的藍色(se)。

5.終(zhong)止液上(shang)板順(shun)序(xu)應同顯色(se)底物上(shang)板順(shun)序(xu)一致；加入終(zhong)止液后，孔(kong)內(nei)(nei)顏色(se)由藍變(bian)黃(huang)；若孔(kong)內(nei)(nei)有綠(lv)色(se)，則表明孔(kong)內(nei)(nei)液體未混(hun)勻；請充分混(hun)合。

說明：

1.豬腺苷激酶(ADK)試劑盒由于現有(you)(you)條件及(ji)科學技術水(shui)平(ping)尚不能對(dui)所(suo)有(you)(you)供貨(huo)商提供的(de)所(suo)有(you)(you)原料(liao)進(jin)行全面的(de)鑒(jian)定(ding)與分析(xi)，本(ben)產(chan)品可能存在一(yi)定(ding)的(de)質(zhi)量技術風險。

2.實(shi)驗結果(guo)與試(shi)劑的(de)(de)有效性、實(shi)驗者的(de)(de)相(xiang)關操作以及當時的(de)(de)實(shi)驗環境密切相(xiang)關，請務必準備充(chong)足(zu)的(de)(de)標本備份。

3.不(bu)同批次的同一產品可能會有少許差別，如：檢測限、靈(ling)敏度(du)以及顯色時間等，請依據試劑盒內(nei)說(shuo)明(ming)(ming)書進行實(shi)驗操(cao)作，網站電子版(ban)說(shuo)明(ming)(ming)書僅作參(can)考。

4.只有全部(bu)使(shi)用本試劑盒配套試劑才能保證(zheng)檢測效果，不能混用其(qi)他制造商的(de)產品。只有嚴(yan)格遵(zun)守本試劑盒的(de)實驗說明才會得(de)到檢測結果。