牛8-羥基鳥嘌呤糖苷酶1(OGG1)試劑盒

本試劑盒僅供(gong)體(ti)外研究使用，不用于臨床診斷

本(ben)試劑盒用于體外定量檢測血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、組織勻漿(jiang)及相關(guan)液體樣本(ben)中(zhong)牛8-羥基鳥嘌呤糖苷酶1(OGG1)的含量。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

試劑盒組成：

備注：

1.（96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物(wu)品是否齊全。

2. 標(biao)準(zhun)品濃(nong)度依次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過大量正常(chang)標本(ben)檢驗(yan)，標本(ben)的正常(chang)濃度值均(jun)在試劑盒提(ti)供的檢測范圍內(nei)，實驗(yan)過程中直接取(qu)50μL樣(yang)本(ben)上樣(yang)即可。當有部分樣(yang)本(ben)值超(chao)過大標準品濃度時，可用(yong)樣(yang)本(ben)稀釋液將標本(ben)進行適當稀釋后再進行實驗(yan)。

檢測前準備工作：

1.請提前20分鐘(zhong)從冰箱中取出試劑盒，平(ping)衡至室溫。

2.從冰箱中取出的(de)濃縮洗滌(di)液(ye)(ye)可能有結晶，屬于正常現象；放置(zhi)室(shi)溫(wen)，輕(qing)搖(yao)均勻，待結晶溶解后再(zai)配(pei)(pei)置(zhi)洗滌(di)液(ye)(ye)。可將20ml濃縮洗滌(di)液(ye)(ye)用蒸餾(liu)水(shui)或去離子水(shui)稀釋配(pei)(pei)置(zhi)成400ml工作濃度(du)的(de)洗滌(di)液(ye)(ye)，未用完的(de)放回4℃

3.20×洗滌(di)緩沖(chong)液的稀(xi)釋：蒸餾水按1：20稀(xi)釋，即1份20×洗滌(di)緩沖(chong)液加19份蒸餾水。

實驗原理：

牛8-羥基鳥嘌呤糖苷酶1(OGG1)試劑盒采(cai)用(yong)雙(shuang)抗體(ti)一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包(bao)被(bei)牛(niu)8-羥(qian)基(ji)鳥嘌呤糖苷酶1(OGG1)捕獲抗體(ti)的包(bao)被(bei)微孔中(zhong)，依次加(jia)入標(biao)本、標(biao)準品(pin)(pin)、HRP標(biao)記的檢測抗體(ti)，經過(guo)溫(wen)育并洗滌。用(yong)底物(wu)TMB顯色，TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶的催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍色，并在(zai)酸的作用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成終的黃色。顏色的深(shen)淺(qian)和樣品(pin)(pin)中(zhong)的牛(niu)8-羥(qian)基(ji)鳥嘌呤糖苷酶1(OGG1)呈正相(xiang)關。用(yong)酶標(biao)儀在(zai)450nm 波長下測定(ding)吸光度（OD 值），計(ji)算樣品(pin)(pin)濃度。

實驗所需自備試驗器材：

1.酶標儀（450nm）

2.高精度(du)加樣器及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾(liu)水(shui)或去離(li)子(zi)水(shui)

樣本處理及要求：

1.血清(qing)：將(jiang)收集于血清(qing)分(fen)離(li)(li)管的全血標本(ben)在室溫放置2小時或(huo)(huo)4℃過夜(ye)，然后1000×g離(li)(li)心20 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即可，或(huo)(huo)將(jiang)上清(qing)置于-20℃或(huo)(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融。

2.血(xue)漿：用EDTA或(huo)肝(gan)素作(zuo)為抗凝劑采集(ji)標(biao)(biao)本，并將(jiang)標(biao)(biao)本在(zai)采集(ji)后的(de)30分鐘(zhong)內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘(zhong)，取上(shang)清即(ji)可檢測，或(huo)將(jiang)上(shang)清置于-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但應避免(mian)反復凍融。

3.組(zu)(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)(zu)織(zhi)，去除殘留血液(ye)(ye)（勻(yun)漿(jiang)中(zhong)裂解的紅細(xi)胞會影響測(ce)量(liang)結果），稱重(zhong)后將(jiang)組(zu)(zu)織(zhi)剪碎。將(jiang)剪碎的組(zu)(zu)織(zhi)與對(dui)應(ying)體積(ji)的PBS（一般按1:9的重(zhong)量(liang)體積(ji)比，比如1g的組(zu)(zu)織(zhi)樣(yang)品對(dui)應(ying)9mL的PBS，具體體積(ji)可根據實驗需要適(shi)當調整，并做好記錄。推薦在(zai)PBS中(zhong)加入(ru)蛋白(bai)酶(mei)抑制劑）加入(ru)玻璃勻(yun)漿(jiang)器(qi)中(zhong)，于(yu)冰上(shang)充分研磨。為了進(jin)一步裂解組(zu)(zu)織(zhi)細(xi)胞，可以對(dui)勻(yun)漿(jiang)液(ye)(ye)進(jin)行超聲破碎，或(huo)反復(fu)凍融(rong)。后將(jiang)勻(yun)漿(jiang)液(ye)(ye)于(yu)5000×g離心5~10分鐘，取上(shang)清(qing)檢(jian)測(ce)。

4.細胞培養物上(shang)清(qing)：請1000×g離心(xin)20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢測，或將上(shang)清(qing)置于-20℃或-80℃保存，但應避免反(fan)復凍融。

5.其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

6.樣品(pin)外(wai)觀(guan)：樣品(pin)應清澈透明，懸浮物應離心(xin)去除(chu)。

7.樣品(pin)保存：樣品(pin)收集后(hou)若(ruo)在1周內進行檢測(ce)的(de)可保存于4℃，若(ruo)不能及時檢測(ce)，請(qing)按一次使用量分裝(zhuang)，凍(dong)存于-20℃（1個(ge)(ge)月(yue)內檢測(ce)），或-80℃（6個(ge)(ge)月(yue)內檢測(ce)），避免(mian)反復凍(dong)融，標(biao)(biao)本溶血會影響后(hou)檢測(ce)結(jie)果，因此溶血標(biao)(biao)本不宜進行此項檢測(ce)。

注意事項：

1.嚴格按照規定的時間和溫度進行(xing)溫育以保證準確結果。所有(you)試劑都必須在使用(yong)前達(da)到室(shi)溫20-25℃。使用(yong)后立即冷(leng)藏(zang)保存(cun)試劑。

2.洗(xi)板不正(zheng)確(que)(que)可(ke)以導(dao)致不準確(que)(que)的結果(guo)。在加入底(di)物前確(que)(que)保(bao)盡量(liang)吸(xi)干孔內液體。溫育(yu)過程(cheng)中不要讓微孔干燥掉。

3.消(xiao)除板底殘(can)留的液(ye)體和手指印(yin)，否則影響OD值。

4.底物(wu)顯色液應呈無色或很淺的(de)顏色，已(yi)經變藍(lan)的(de)底物(wu)液不能使用。

5.避(bi)免試劑和標本的交叉污(wu)染以(yi)免造成錯誤結果。

6.在(zai)儲存和(he)溫育時避免強光直(zhi)接照射。

7.平衡至(zhi)室(shi)溫后再(zai)打(da)開密封袋以防水滴凝聚在冷板條(tiao)上。

8.任(ren)(ren)何(he)反應試劑(ji)(ji)(ji)不(bu)能接觸漂白(bai)溶(rong)劑(ji)(ji)(ji)或(huo)漂白(bai)溶(rong)劑(ji)(ji)(ji)所散發的強(qiang)烈氣(qi)體。任(ren)(ren)何(he)漂白(bai)成分(fen)都會(hui)破(po)壞試劑(ji)(ji)(ji)盒中反應試劑(ji)(ji)(ji)的生物(wu)活性。

9.不能使(shi)用過期產(chan)品。

10.如(ru)果可能傳(chuan)播疾病，所有的樣品(pin)都(dou)應管理(li)好，按照規(gui)定(ding)的程序處理(li)樣品(pin)和檢測裝置。

操作步驟：

1．從室溫平衡60min后的鋁(lv)箔袋(dai)中取出(chu)所(suo)需板(ban)條(tiao)，剩余板(ban)條(tiao)用(yong)自(zi)封袋(dai)密封放回4℃。

2．設置標(biao)準品孔和樣本孔，標(biao)準品孔各加不同濃度的標(biao)準品50μL。

3．樣(yang)本孔中a加(jia)入(ru)待測樣(yang)本50μL；空(kong)白孔不加(jia)。

4．除(chu)空白孔(kong)外，標(biao)準品(pin)孔(kong)和樣本孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加入辣根過氧化物酶(mei)（HRP）標(biao)記的檢(jian)測抗體100μL，用封板(ban)膜封住(zhu)反應孔(kong)，37℃水浴鍋(guo)或(huo)恒溫箱溫育(yu)60min。

5．棄去(qu)液(ye)(ye)體，吸水(shui)紙上拍(pai)(pai)干，每(mei)孔加滿洗滌液(ye)(ye)（350μL），靜置1min，甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye)(ye)，吸水(shui)紙上拍(pai)(pai)干，如此重復洗板5次(ci)（也可用洗板機洗板）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7．每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算：

繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值(zhi)作縱坐標，繪制出標準品線性(xing)回(hui)歸曲線，按曲線方程計算各(ge)樣本(ben)濃度值(zhi)。

（此圖僅供參考）

性能：

1. 檢測范(fan)圍(wei)：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈(ling)敏度：低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

3.特異(yi)性：不(bu)與其(qi)它(ta)可溶性結構類似物(wu)交叉反應。

4.重復性：板(ban)內變異系數小(xiao)于10% ，板(ban)間變異系數小(xiao)于15% 。

技術小提示：

1.當混合(he)或重溶蛋白(bai)溶液時，盡量避免(mian)起沫(mo)。

2.牛8-羥基鳥嘌呤糖苷酶1(OGG1)試劑盒為(wei)了避免交叉(cha)感染(ran)，配置不(bu)同濃度標準品(pin)、上樣、加不(bu)同試劑都(dou)需要更換槍(qiang)頭。另外不(bu)同試劑請分別使用不(bu)同的(de)移液槽。

3.每次孵育時，請(qing)正確使用封板(ban)膠可保證結果的準確性。

4.混合后(hou)的顯色底物在上板前(qian)應為無色，請避(bi)光(guang)保存；假如微孔板后(hou)，將由物色變成不同深度的藍(lan)色。

5.終止液上板順序應同顯色底物(wu)上板順序一致；加入終止液后(hou)，孔內顏色由藍變黃(huang)；若孔內有綠色，則表明孔內液體未混勻(yun)；請充分混合。

說明：

1.由(you)于現有(you)條件及(ji)科學技術(shu)水平尚(shang)不能(neng)對所(suo)(suo)有(you)供貨商(shang)提供的(de)所(suo)(suo)有(you)原料(liao)進行全面的(de)鑒定(ding)(ding)與分(fen)析，本產(chan)品可能(neng)存在一定(ding)(ding)的(de)質量技術(shu)風(feng)險。

2.實驗(yan)結果(guo)與(yu)試劑的有效性、實驗(yan)者的相關(guan)操(cao)作以及當時的實驗(yan)環境密切相關(guan)，請務必準(zhun)備充足的標本備份。

3.不(bu)同批次的同一產品可能會有少許差(cha)別，如(ru)：檢測限、靈敏度以及顯色時(shi)間等(deng)，請依據(ju)試劑(ji)盒(he)內說(shuo)明(ming)書進(jin)行實驗操作(zuo)，網站電子版說(shuo)明(ming)書僅作(zuo)參考。

4.只有全部(bu)使用(yong)本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)配套試(shi)劑(ji)才能(neng)保證檢測(ce)效果(guo)(guo)，不能(neng)混用(yong)其他制造商(shang)的(de)(de)產品。只有嚴格遵守本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)(de)實驗(yan)說明才會得到的(de)(de)檢測(ce)結果(guo)(guo)。