綿(mian)羊γ干擾(rao)素(su)(IFN-γ)試劑盒

本試劑盒僅供(gong)體外研究使用(yong)，不用(yong)于(yu)臨床(chuang)診斷

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中綿羊γ干擾素(IFN-γ)的含量。

有效期：6個月(yue)

保存(cun)條件：2-8℃

試劑盒組(zu)成：

備注：

1.（96T/48T）打開包裝后(hou)請及時檢(jian)查所有物品是否齊全。

2. 標準(zhun)品濃度依次(ci)為(wei)：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經(jing)過大量正常(chang)標(biao)本(ben)檢(jian)驗(yan)，標(biao)本(ben)的正常(chang)濃度(du)值均在試劑盒提供的檢(jian)測(ce)范圍內，實(shi)驗(yan)過程中直接取50μL樣(yang)本(ben)上樣(yang)即可。當有部(bu)分(fen)樣(yang)本(ben)值超(chao)過大標(biao)準(zhun)品濃度(du)時，可用樣(yang)本(ben)稀釋液(ye)將標(biao)本(ben)進行(xing)適當稀釋后再進行(xing)實(shi)驗(yan)。

檢測前準備工作：

1.請提前(qian)20分鐘從冰箱中(zhong)取出(chu)試劑(ji)盒，平衡至(zhi)室溫。

2.從冰(bing)箱中(zhong)取(qu)出(chu)的濃(nong)縮洗(xi)(xi)滌液可能有結(jie)晶，屬于正常(chang)現象(xiang)；放置室溫(wen)，輕搖(yao)均(jun)勻，待結(jie)晶溶解后再配置洗(xi)(xi)滌液。可將20ml濃(nong)縮洗(xi)(xi)滌液用蒸餾水或(huo)去(qu)離(li)子水稀釋配置成400ml工作濃(nong)度的洗(xi)(xi)滌液，未用完的放回4℃

3.20×洗滌緩(huan)沖液(ye)(ye)的稀釋(shi)(shi)：蒸餾水按1：20稀釋(shi)(shi)，即1份(fen)20×洗滌緩(huan)沖液(ye)(ye)加19份(fen)蒸餾水。

實驗(yan)原理：

綿羊γ干擾素(IFN-γ)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被綿羊γ干擾素(IFN-γ)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的綿羊γ干擾素(IFN-γ)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗(yan)所需自備試驗(yan)器材：

1.酶(mei)標儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水或去離子水

樣(yang)本處理及(ji)要求：

1.血清(qing)：將收集于(yu)血清(qing)分離管(guan)的(de)全血標本在室(shi)溫放置(zhi)2小時或(huo)4℃過(guo)夜，然后1000×g離心(xin)20 分鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)即可，或(huo)將上(shang)清(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但應避(bi)免(mian)反復凍融(rong)。

2.血漿：用(yong)EDTA或(huo)肝素作為抗凝劑采(cai)(cai)集(ji)標(biao)本，并將標(biao)本在采(cai)(cai)集(ji)后的30分(fen)鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分(fen)鐘，取上(shang)清(qing)即可檢測，或(huo)將上(shang)清(qing)置于-20℃或(huo)-80℃保存，但應避免反復(fu)凍融。

3.組織(zhi)(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)：用預(yu)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織(zhi)(zhi)，去除殘留(liu)血(xue)液（勻(yun)漿(jiang)(jiang)中裂解的紅細胞會影(ying)響測(ce)量結(jie)果），稱(cheng)重后將(jiang)組織(zhi)(zhi)剪碎(sui)(sui)。將(jiang)剪碎(sui)(sui)的組織(zhi)(zhi)與(yu)對應體(ti)積的PBS（一般按1:9的重量體(ti)積比，比如(ru)1g的組織(zhi)(zhi)樣(yang)品對應9mL的PBS，具(ju)體(ti)體(ti)積可根據實驗需要適(shi)當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入(ru)蛋白(bai)酶抑制劑(ji)）加入(ru)玻璃勻(yun)漿(jiang)(jiang)器中，于(yu)冰(bing)上充分研(yan)磨。為了進一步裂解組織(zhi)(zhi)細胞，可以對勻(yun)漿(jiang)(jiang)液進行超聲破碎(sui)(sui)，或反復凍融。后將(jiang)勻(yun)漿(jiang)(jiang)液于(yu)5000×g離心5~10分鐘，取(qu)上清檢測(ce)。

4.細胞培養物上清：請(qing)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上清置于-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避(bi)免(mian)反復凍融。

5.其它生物標本：1000×g離心20分鐘(zhong)，取上清即可(ke)檢測(ce)。

6.樣品外觀：樣品應清(qing)澈透(tou)明，懸(xuan)浮物應離心去除。

7.樣品(pin)保(bao)存：樣品(pin)收集后(hou)若(ruo)在1周內進行檢測(ce)(ce)的可保(bao)存于(yu)4℃，若(ruo)不能及時檢測(ce)(ce)，請按(an)一次使用量分裝(zhuang)，凍存于(yu)-20℃（1個(ge)月內檢測(ce)(ce)），或(huo)-80℃（6個(ge)月內檢測(ce)(ce)），避免反復凍融(rong)，標本溶血會影響后(hou)檢測(ce)(ce)結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測(ce)(ce)。

注意事(shi)項：

1.嚴格(ge)按照規定的時間和溫(wen)度進行溫(wen)育以(yi)保(bao)證準確結果。所有試劑都必須(xu)在使用前達到室溫(wen)20-25℃。使用后(hou)立即冷(leng)藏保(bao)存試劑。

2.洗(xi)板(ban)不正確(que)可以導致不準確(que)的結果。在加入底物前(qian)確(que)保盡(jin)量(liang)吸干孔內液體。溫育過(guo)程中不要讓微孔干燥掉。

3.消除板底殘留的液(ye)體和手指印，否則影響(xiang)OD值(zhi)。

4.底物顯色(se)液(ye)應呈無色(se)或很淺(qian)的(de)顏色(se)，已經變藍的(de)底物液(ye)不能(neng)使用。

5.避免(mian)試(shi)劑和標(biao)本的交叉污染(ran)以免(mian)造成錯(cuo)誤(wu)結(jie)果。

6.在儲(chu)存和溫育時避免(mian)強光直接照射(she)。

7.平衡至(zhi)室溫后再打(da)開密(mi)封袋以防(fang)水滴凝聚在冷板條上。

8.任(ren)何反應試(shi)劑(ji)不能(neng)接觸(chu)漂白溶劑(ji)或漂白溶劑(ji)所(suo)散發的強(qiang)烈氣(qi)體。任(ren)何漂白成分都會破(po)壞試(shi)劑(ji)盒中反應試(shi)劑(ji)的生物活性。

9.不(bu)能使用(yong)過期產品。

10.如果可能傳播(bo)疾病，所有的(de)樣(yang)品都應管理好(hao)，按照規定的(de)程序處理樣(yang)品和檢(jian)測裝置(zhi)。

操作步驟(zou)：

1．綿羊γ干擾素(IFN-γ)試劑盒從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2．設置標(biao)準品孔(kong)和樣本(ben)孔(kong)，標(biao)準品孔(kong)各加不同濃度的(de)標(biao)準品50μL。

3．樣本孔(kong)(kong)中a加入待測樣本50μL；空白孔(kong)(kong)不加。

4．除(chu)空白(bai)孔(kong)外，標(biao)準品(pin)孔(kong)和樣本孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加入辣(la)根過氧化(hua)物酶（HRP）標(biao)記的檢測抗體(ti)100μL，用(yong)封板膜封住反應孔(kong)，37℃水浴鍋或恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育60min。

5．棄(qi)去(qu)液(ye)體，吸水紙上(shang)拍(pai)干(gan)，每孔加滿洗(xi)滌液(ye)（350μL），靜置1min，甩去(qu)洗(xi)滌液(ye)，吸水紙上(shang)拍(pai)干(gan)，如此重復洗(xi)板(ban)5次（也(ye)可用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)板(ban)）。

6．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避(bi)光(guang)孵育(yu)15min。

7．每孔加入終(zhong)止液50μL，15min內，在(zai)450nm波長(chang)處測定(ding)各孔的OD值。

實驗結果計算：

繪(hui)制標準曲(qu)(qu)線(xian)：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪(hui)制出標準品線(xian)性回歸曲(qu)(qu)線(xian)，按曲(qu)(qu)線(xian)方程計算各樣本濃度值。

（此圖僅供參考）

性能：

1. 檢(jian)測(ce)范圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度：低檢測濃(nong)度小于1.0 pg/mL。

3.特異(yi)性(xing)：不與其它可溶性(xing)結構類似物交叉反應。

4.重復性(xing)：板(ban)內變異(yi)系數小(xiao)于10% ，板(ban)間變異(yi)系數小(xiao)于15% 。

技術小提(ti)示：

1.當混合或重(zhong)溶(rong)蛋白溶(rong)液時，盡(jin)量避免起(qi)沫。

2.為了避(bi)免交(jiao)叉感染，配置不(bu)同濃度標準品、上樣(yang)、加不(bu)同試劑都需(xu)要更換槍頭。另外(wai)不(bu)同試劑請分別使用不(bu)同的移液槽(cao)。

3.每次(ci)孵育時(shi)，請正確使用(yong)封板(ban)膠可保證結果(guo)的(de)準確性。

4.混合后的顯色(se)(se)底物(wu)在上板(ban)前(qian)應為無色(se)(se)，請避光保存；假如微孔板(ban)后，將由物(wu)色(se)(se)變成不同深度的藍色(se)(se)。

5.終止(zhi)液上板順(shun)(shun)序(xu)應同顯色(se)底物上板順(shun)(shun)序(xu)一致(zhi)；加入終止(zhi)液后，孔(kong)(kong)內(nei)顏色(se)由藍變黃；若孔(kong)(kong)內(nei)有(you)綠色(se)，則表(biao)明孔(kong)(kong)內(nei)液體未混(hun)勻；請充分(fen)混(hun)合(he)。

說明(ming)：

1.由于現有(you)(you)條(tiao)件(jian)及(ji)科學技術(shu)水平尚不(bu)能對所有(you)(you)供貨商提供的所有(you)(you)原料進行全面的鑒定(ding)與分析，本產品可能存(cun)在一定(ding)的質量技術(shu)風險(xian)。

2.終的實驗(yan)結果與試(shi)劑的有效性、實驗(yan)者的相關(guan)操(cao)作以及(ji)當時的實驗(yan)環境密切相關(guan)，請(qing)務(wu)必準(zhun)備充足的標本(ben)備份。

3.不同批(pi)次(ci)的(de)同一產品可能會(hui)有少許差(cha)別，如：檢(jian)測限、靈敏(min)度(du)以(yi)及顯色時間等，請依據(ju)試(shi)劑盒(he)內說明書進行實驗操作(zuo)，網站電(dian)子版說明書僅(jin)作(zuo)參考。

4.只(zhi)有(you)全部使用(yong)本(ben)試劑(ji)盒配套試劑(ji)才(cai)(cai)能保證檢(jian)(jian)測效果(guo)，不能混用(yong)其他制(zhi)造(zao)商的產品。只(zhi)有(you)嚴格遵守(shou)本(ben)試劑(ji)盒的實(shi)驗說明才(cai)(cai)會得到佳的檢(jian)(jian)測結果(guo)。