本試劑盒用于體(ti)外定量檢測血(xue)清、血(xue)漿、組織勻漿及相關液體(ti)樣本中雞超氧(yang)化物歧化酶(SOD）的(de)含量。

有(you)效期(qi)：6個月

保存條件：2-8℃

雞超氧化(hua)物歧化(hua)酶(SOD)ELISA試劑盒組成：

備注(zhu)：

1.（96T/48T）打開包(bao)裝后請及(ji)時檢(jian)查所有(you)物(wu)品是(shi)否齊全。

2. 標準品濃度依(yi)次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過(guo)大(da)量正常標(biao)本檢驗(yan)，標(biao)本的(de)(de)正常濃度值均在試劑(ji)盒提供(gong)的(de)(de)檢測范圍(wei)內，實驗(yan)過(guo)程中直接取50μL樣本上樣即(ji)可(ke)。當(dang)有部分(fen)樣本值超過(guo)標(biao)準(zhun)品濃度時，可(ke)用(yong)樣本稀(xi)釋液將標(biao)本進(jin)行適當(dang)稀(xi)釋后(hou)再進(jin)行實驗(yan)。

檢測前準(zhun)備工作：

1.請(qing)提前20分(fen)鐘從冰箱中取出(chu)試劑(ji)盒，平衡(heng)至室(shi)溫。

2.從冰箱(xiang)中取出的(de)濃縮洗滌液(ye)(ye)(ye)可(ke)能有(you)結(jie)(jie)晶，屬于正常現象；放(fang)置室溫(wen)，輕搖均(jun)勻，待結(jie)(jie)晶溶解后再(zai)配置洗滌液(ye)(ye)(ye)。可(ke)將20ml濃縮洗滌液(ye)(ye)(ye)用蒸餾(liu)水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的(de)洗滌液(ye)(ye)(ye)，未(wei)用完的(de)放(fang)回4℃

3.20×洗滌(di)緩(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)的稀釋(shi)：蒸餾水按1：20稀釋(shi)，即1份(fen)20×洗滌(di)緩(huan)沖(chong)(chong)液(ye)(ye)加19份(fen)蒸餾水。

實驗原理：

試劑(ji)盒采用雙抗體一步夾心法酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附試驗（ELISA）。往(wang)預先(xian)包被雞超(chao)氧化(hua)物歧化(hua)酶(mei)(SOD）捕獲抗體的(de)(de)包被微孔中，依次(ci)加入標(biao)本、標(biao)準品(pin)(pin)、HRP標(biao)記的(de)(de)檢測(ce)抗體，經過溫(wen)育洗(xi)滌。用底物TMB顯(xian)色(se)，TMB在過氧化(hua)物酶(mei)的(de)(de)催化(hua)下(xia)(xia)轉化(hua)成藍色(se)，并在酸的(de)(de)作用下(xia)(xia)轉化(hua)成最終的(de)(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)(de)深淺和樣品(pin)(pin)中的(de)(de)雞超(chao)氧化(hua)物歧化(hua)酶(mei)(SOD）呈(cheng)正相關。用酶(mei)標(biao)儀在450nm 波長(chang)下(xia)(xia)測(ce)定吸(xi)光(guang)度（OD 值），計算樣品(pin)(pin)濃度。

實驗(yan)所需自(zi)備試(shi)驗(yan)器材：

1.酶標儀（450nm）

2.高精(jing)度加(jia)樣器及槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫(wen)箱(xiang)

4.蒸餾水或去離子水

樣本處理及要(yao)求：

1.血(xue)清(qing)(qing)：將(jiang)收集于(yu)血(xue)清(qing)(qing)分離管(guan)的(de)全血(xue)標(biao)本在室溫放(fang)置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘(zhong)，取上清(qing)(qing)即可，或將(jiang)上清(qing)(qing)置于(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反復凍融(rong)。

2.血漿：用EDTA或肝素作為抗(kang)凝劑(ji)采集標本(ben)(ben)，并將標本(ben)(ben)在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取(qu)上(shang)清即可檢(jian)測，或將上(shang)清置于-20℃或-80℃保(bao)存，但應避(bi)免反復凍融。

3.組織(zhi)勻漿：用預冷的(de)(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織(zhi)，去除(chu)殘(can)留血(xue)液（勻漿中(zhong)裂(lie)解的(de)(de)(de)紅細胞會影(ying)響測量結(jie)果），稱重(zhong)后將組織(zhi)剪(jian)碎。將剪(jian)碎的(de)(de)(de)組織(zhi)與(yu)對(dui)應(ying)體積(ji)的(de)(de)(de)PBS（一般按1:9的(de)(de)(de)重(zhong)量體積(ji)比，比如(ru)1g的(de)(de)(de)組織(zhi)樣品對(dui)應(ying)9mL的(de)(de)(de)PBS，具體體積(ji)可(ke)根據(ju)實(shi)驗需要適當調整，并(bing)做好記(ji)錄。推薦在PBS中(zhong)加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中(zhong)，于冰(bing)上(shang)充分研磨。為了(le)進一步(bu)裂(lie)解組織(zhi)細胞，可(ke)以對(dui)勻漿液進行超聲破碎，或(huo)反復凍(dong)融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取(qu)上(shang)清檢(jian)測。

4.細胞(bao)培養物上清(qing)：請1000×g離心20分鐘，取上清(qing)即可檢測，或將上清(qing)置于-20℃或-80℃保存，但應避(bi)免(mian)反復(fu)凍融。

5.其它生物標本(ben)：1000×g離心(xin)20分(fen)鐘，取上(shang)清即可檢測(ce)。

6.樣(yang)品外觀：樣(yang)品應(ying)清澈透明(ming)，懸浮物(wu)應(ying)離心去除。

7.樣品保存(cun)：樣品收集后(hou)若在(zai)1周(zhou)內進(jin)(jin)行檢(jian)(jian)測(ce)(ce)的可保存(cun)于(yu)4℃，若不(bu)能(neng)及(ji)時(shi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)，請(qing)按一次使(shi)用量分裝，凍(dong)存(cun)于(yu)-20℃（1個月(yue)內檢(jian)(jian)測(ce)(ce)），或-80℃（6個月(yue)內檢(jian)(jian)測(ce)(ce)），避(bi)免(mian)反復凍(dong)融，標(biao)(biao)本(ben)溶血(xue)會影響最后(hou)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)結果，因此溶血(xue)標(biao)(biao)本(ben)不(bu)宜進(jin)(jin)行此項(xiang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。

注意(yi)事項：

1.嚴格按照規(gui)定的時間和(he)溫度(du)進行溫育以保證(zheng)準確結(jie)果。所有試劑都必(bi)須在使(shi)用(yong)前達到(dao)室溫20-25℃。使(shi)用(yong)后立即冷藏(zang)保存試劑。

2.洗(xi)板不(bu)正確可以(yi)導致(zhi)不(bu)準(zhun)確的結果(guo)。在加入底物前(qian)確保(bao)盡量(liang)吸干孔內液體。溫育過程(cheng)中不(bu)要讓(rang)微孔干燥掉(diao)。

3.消(xiao)除板底(di)殘(can)留的液體和手指印，否(fou)則(ze)影響OD值。

4.底物顯色(se)液應呈無色(se)或很淺的(de)顏(yan)色(se)，已經變(bian)藍的(de)底物液不能使用。

5.避免試劑和(he)標本的交(jiao)叉污染以(yi)免造成錯誤結果。

6.在儲存和(he)溫育時避免(mian)強(qiang)光直接(jie)照射。

7.平(ping)衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝(ning)聚(ju)在冷(leng)板條上(shang)。

8.任何(he)(he)反應試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)不能接觸漂(piao)(piao)白(bai)(bai)溶(rong)劑(ji)(ji)(ji)或(huo)漂(piao)(piao)白(bai)(bai)溶(rong)劑(ji)(ji)(ji)所散發的(de)強烈氣體。任何(he)(he)漂(piao)(piao)白(bai)(bai)成分都會破壞試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)盒(he)中反應試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)的(de)生物活性。

9.不(bu)能使用過(guo)期產品。

10.如(ru)果可(ke)能傳播疾病(bing)，所有(you)的(de)(de)樣(yang)(yang)品都應管理好，按照規定的(de)(de)程序(xu)處(chu)理樣(yang)(yang)品和檢測(ce)裝置。

操作步驟：

1．從室溫平衡60min后的鋁箔袋中(zhong)取出所需板(ban)條，剩余板(ban)條用自封(feng)袋密封(feng)放回(hui)4℃。

2．設置標(biao)準(zhun)品孔和樣(yang)本(ben)孔，標(biao)準(zhun)品孔各加不同濃(nong)度的標(biao)準(zhun)品50μL。

3．樣(yang)本(ben)孔中a加(jia)入(ru)待測樣(yang)本(ben)50μL；空(kong)白孔不加(jia)。

4．除空白孔(kong)(kong)(kong)外，標準(zhun)品孔(kong)(kong)(kong)和樣本孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)(kong)(kong)加入辣(la)根(gen)過氧化物酶(mei)（HRP）標記的檢(jian)測(ce)抗體100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反(fan)應孔(kong)(kong)(kong)，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育(yu)60min。

5．棄去液(ye)體，吸水紙(zhi)上拍(pai)干，每孔加滿(man)洗(xi)(xi)滌(di)液(ye)（350μL），靜置1min，甩去洗(xi)(xi)滌(di)液(ye)，吸水紙(zhi)上拍(pai)干，如此重復(fu)洗(xi)(xi)板(ban)5次（也可(ke)用洗(xi)(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)(xi)板(ban)）。

6．每孔加入底物A、B各(ge)50μL，37℃避光孵育15min。

7．每(mei)孔(kong)加入終止液50μL，15min內(nei)，在450nm波長(chang)處測定各孔(kong)的(de)OD值。

實驗結(jie)果計算：

繪(hui)制標(biao)準(zhun)曲線(xian)(xian)：在Excel工作表(biao)中，以標(biao)準(zhun)品濃(nong)度作橫坐標(biao)，對應OD值(zhi)作縱(zong)坐標(biao)，繪(hui)制出標(biao)準(zhun)品線(xian)(xian)性回歸曲線(xian)(xian)，按(an)曲線(xian)(xian)方程(cheng)計(ji)算各樣(yang)本濃(nong)度值(zhi)。

（此圖僅(jin)供參考(kao)）

雞超氧(yang)化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒性能：

1. 檢測范(fan)圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度：檢測濃(nong)度小于1.0 pg/mL。

3.特異性：不與其它可溶性結構類似物(wu)交(jiao)叉反(fan)應。

4.重復性：板內變異系(xi)數小于10% ，板間變異系(xi)數小于15% 。

技術小提示：

1.當(dang)混合或重(zhong)溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。

2.為了避免交叉(cha)感染(ran)，配置不同(tong)濃度標準(zhun)品(pin)、上樣(yang)、加不同(tong)試(shi)劑都(dou)需(xu)要更換(huan)槍頭。另外不同(tong)試(shi)劑請分別使用(yong)不同(tong)的移液槽。

3.每次孵育時(shi)，請(qing)正(zheng)確使(shi)用封板膠(jiao)可保證結果的準確性(xing)。

4.混(hun)合后的(de)顯色底物在上板前(qian)應為(wei)無色，請避光保存；假(jia)如(ru)微(wei)孔板后，將由物色變成不同深度的(de)藍色。

5.終(zhong)止液(ye)上板順序應同顯(xian)色底(di)物上板順序一致；加入終(zhong)止液(ye)后，孔(kong)內顏色由藍變黃(huang)；若孔(kong)內有綠色，則表明孔(kong)內液(ye)體(ti)未混勻(yun)；請(qing)充分混合。

說明：

1.由于(yu)現有條件及科學(xue)技(ji)術(shu)水平尚(shang)不能對所有供貨商提供的(de)所有原料進(jin)行全面的(de)鑒(jian)定(ding)(ding)與(yu)分(fen)析，本產品可能存在一(yi)定(ding)(ding)的(de)質量技(ji)術(shu)風險(xian)。

2.實驗(yan)結果與試劑的有(you)效性、實驗(yan)者的相關操作(zuo)以及當(dang)時的實驗(yan)環境密切相關，請務必準備(bei)充(chong)足的標本備(bei)份(fen)。

3.不(bu)同(tong)批次的同(tong)一(yi)產品(pin)可能(neng)會(hui)有少許(xu)差別，如：檢測限(xian)、靈敏度以及顯(xian)色(se)時間等，請(qing)依(yi)據試劑盒內說(shuo)明(ming)書進行實驗操作，網站電子版說(shuo)明(ming)書僅(jin)作參考。

4.只有(you)全部使用本試劑(ji)(ji)盒配套(tao)試劑(ji)(ji)才(cai)能(neng)保證檢測效果(guo)，不能(neng)混用其他(ta)制造(zao)商的(de)產品。只有(you)嚴格遵(zun)守本試劑(ji)(ji)盒的(de)實(shi)驗說(shuo)明才(cai)會得(de)到(dao)檢測結果(guo)。