本試劑(ji)盒(he)僅供體外(wai)研究(jiu)使用，不用于臨床診斷

本試劑(ji)盒用于體(ti)外定量檢(jian)測血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)、組織勻(yun)漿(jiang)及相關液體(ti)樣(yang)本中(zhong)小(xiao)鼠C反應蛋(dan)白(bai)(CRP)的含量。

有效(xiao)期：6個月

保(bao)存(cun)條件：2-8℃

小鼠C反應蛋白(CRP)試劑盒(he)組成：

備注：

1.（96T/48T）打開包裝后請及時(shi)檢查所(suo)有物品是否(fou)齊全。

2. 標準品濃(nong)度依次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過大量正(zheng)常標本檢(jian)驗，標本的正(zheng)常濃度值(zhi)均在(zai)試(shi)劑盒提供的檢(jian)測范圍(wei)內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值(zhi)超(chao)過標準(zhun)品濃度時，可用(yong)樣本稀(xi)釋液將標本進(jin)行適當稀(xi)釋后再進(jin)行實驗。

檢測(ce)前準(zhun)備工作：

1.請提前(qian)20分鐘從冰(bing)箱中取(qu)出試劑盒，平衡至室溫。

2.從冰箱中取出的濃(nong)縮(suo)洗滌液可能有結(jie)晶，屬于正常現象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jie)晶溶解(jie)后再(zai)配置洗滌液。可將20ml濃(nong)縮(suo)洗滌液用蒸(zheng)餾水或去離子水稀釋(shi)配置成400ml工(gong)作濃(nong)度的洗滌液，未用完(wan)的放回4℃

3.20×洗滌緩沖液的稀釋(shi)：蒸(zheng)餾水按1：20稀釋(shi)，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸(zheng)餾水。

實驗(yan)原理：

試劑(ji)盒采(cai)用雙抗體一步夾(jia)心法酶(mei)聯(lian)免疫吸附試驗（ELISA）。往(wang)預先(xian)包被小鼠(shu)C反應(ying)蛋(dan)白(bai)(CRP)捕獲抗體的(de)(de)包被微孔中，依次(ci)加入(ru)標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記的(de)(de)檢測(ce)抗體，經過溫育并洗滌(di)。用底物TMB顯色，TMB在過氧化(hua)物酶(mei)的(de)(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色，并在酸的(de)(de)作用下(xia)轉化(hua)成(cheng)最終的(de)(de)黃色。顏(yan)色的(de)(de)深淺(qian)和樣(yang)品中的(de)(de)小鼠(shu)C反應(ying)蛋(dan)白(bai)(CRP)呈(cheng)正相(xiang)關。用酶(mei)標(biao)儀在450nm 波(bo)長下(xia)測(ce)定吸光度（OD 值），計算樣(yang)品濃度。

實驗(yan)所需自(zi)備(bei)試驗(yan)器材(cai)：

1.酶標儀(yi)（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸(zheng)餾(liu)水或去離子水

樣本處理及要求：

1.血(xue)清：將收(shou)集(ji)于(yu)血(xue)清分離管的全血(xue)標(biao)本在室溫放置2小(xiao)時或4℃過夜，然后1000×g離心(xin)20 分鐘，取上(shang)清即可，或將上(shang)清置于(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但應避免(mian)反復凍融。

2.血漿：用EDTA或肝素作為(wei)抗凝劑采集標本(ben)(ben)，并將標本(ben)(ben)在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上(shang)清即可(ke)檢測，或將上(shang)清置(zhi)于-20℃或-80℃保(bao)存，但應(ying)避免反(fan)復凍(dong)融。

3.組(zu)(zu)(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)：用預冷(leng)的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)(zu)(zu)織(zhi)，去除殘留血液(ye)(ye)（勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)中裂(lie)解的紅細(xi)胞(bao)會(hui)影響測量(liang)結(jie)果），稱重(zhong)(zhong)后將組(zu)(zu)(zu)織(zhi)剪(jian)碎。將剪(jian)碎的組(zu)(zu)(zu)織(zhi)與對應體(ti)積(ji)的PBS（一般按(an)1:9的重(zhong)(zhong)量(liang)體(ti)積(ji)比(bi)，比(bi)如1g的組(zu)(zu)(zu)織(zhi)樣品對應9mL的PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根據實驗需要適當調整，并(bing)做好記錄。推薦在PBS中加(jia)入(ru)蛋白酶抑制劑(ji)）加(jia)入(ru)玻璃(li)勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)器中，于冰上(shang)充分研磨。為(wei)了進(jin)一步裂(lie)解組(zu)(zu)(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)，可(ke)以對勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)液(ye)(ye)進(jin)行超聲破碎，或(huo)反(fan)復凍融。最(zui)后將勻(yun)漿(jiang)(jiang)(jiang)液(ye)(ye)于5000×g離心5~10分鐘，取上(shang)清檢測。

4.細胞培(pei)養物上(shang)清(qing)：請1000×g離心(xin)20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢測(ce)，或將(jiang)上(shang)清(qing)置于-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反復凍(dong)融。

5.其它生物(wu)標本：1000×g離心20分鐘(zhong)，取上清即可檢測。

6.樣品(pin)外觀：樣品(pin)應清澈透明，懸浮(fu)物應離心(xin)去除(chu)。

7.樣(yang)品(pin)保存(cun)：樣(yang)品(pin)收集后若在(zai)1周內進行(xing)(xing)檢(jian)(jian)測(ce)的可保存(cun)于4℃，若不能及(ji)時檢(jian)(jian)測(ce)，請按一次(ci)使用(yong)量分裝，凍存(cun)于-20℃（1個(ge)月內檢(jian)(jian)測(ce)），或-80℃（6個(ge)月內檢(jian)(jian)測(ce)），避免反復(fu)凍融，標本溶血會影響檢(jian)(jian)測(ce)結果，因此(ci)溶血標本不宜(yi)進行(xing)(xing)此(ci)項檢(jian)(jian)測(ce)。

注意事(shi)項：

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1.嚴格按照(zhao)規(gui)定的時(shi)間(jian)和溫(wen)度進行溫(wen)育(yu)以保證準確結果。所(suo)有試(shi)劑都必須在使用前達到室溫(wen)20-25℃。使用后立即冷藏保存試(shi)劑。

2.洗板不(bu)(bu)正確(que)可以導(dao)致不(bu)(bu)準(zhun)確(que)的結果。在加入(ru)底物(wu)前(qian)確(que)保盡量吸干(gan)孔(kong)(kong)內液體。溫育過(guo)程中(zhong)不(bu)(bu)要(yao)讓微(wei)孔(kong)(kong)干(gan)燥掉。

3.消除板(ban)底殘留的液體和手指印，否則影響(xiang)OD值。

4.底物顯色液(ye)應呈無(wu)色或很淺的(de)顏色，已(yi)經變藍的(de)底物液(ye)不能(neng)使用。

5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6.在儲(chu)存和(he)溫育時(shi)避免強光(guang)直接(jie)照射。

7.平衡(heng)至室溫后再打(da)開密(mi)封袋(dai)以防水滴(di)凝聚(ju)在冷板(ban)條(tiao)上。

8.任何反應(ying)試劑(ji)(ji)(ji)不能(neng)接觸漂白(bai)(bai)溶劑(ji)(ji)(ji)或漂白(bai)(bai)溶劑(ji)(ji)(ji)所散發的強烈(lie)氣體。任何漂白(bai)(bai)成分都會破壞試劑(ji)(ji)(ji)盒中(zhong)反應(ying)試劑(ji)(ji)(ji)的生(sheng)物活性。

9.不能使用過期(qi)產品(pin)。

10.如(ru)果可能(neng)傳播疾病，所有的樣品都(dou)應管理好，按(an)照規定的程序處理樣品和檢測裝置(zhi)。

小鼠C反應蛋白(CRP)試劑(ji)盒(he)操作步驟：

1．從室溫平衡60min后的鋁箔袋(dai)中取出所需(xu)板條，剩(sheng)余板條用自封袋(dai)密封放回(hui)4℃。

2．設置標準(zhun)品(pin)(pin)孔(kong)和樣本(ben)孔(kong)，標準(zhun)品(pin)(pin)孔(kong)各加不同濃(nong)度的(de)標準(zhun)品(pin)(pin)50μL。

3．樣本孔中a加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4．除空白(bai)孔(kong)(kong)(kong)外，標準(zhun)品(pin)孔(kong)(kong)(kong)和樣本孔(kong)(kong)(kong)中每孔(kong)(kong)(kong)加入辣根過氧化(hua)物酶（HRP）標記(ji)的檢測抗體100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反應孔(kong)(kong)(kong)，37℃水(shui)浴鍋或恒溫箱(xiang)溫育(yu)60min。

5．棄去(qu)(qu)液(ye)體，吸(xi)水紙(zhi)上拍干(gan)，每孔加滿洗(xi)(xi)(xi)滌(di)液(ye)（350μL），靜置(zhi)1min，甩去(qu)(qu)洗(xi)(xi)(xi)滌(di)液(ye)，吸(xi)水紙(zhi)上拍干(gan)，如此重復洗(xi)(xi)(xi)板(ban)5次（也可用洗(xi)(xi)(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)(xi)(xi)板(ban)）。

6．每(mei)孔加入底物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7．每孔加入終(zhong)止(zhi)液50μL，15min內，在450nm波長(chang)處測定(ding)各孔的OD值。

實驗結果計(ji)算：

繪制標(biao)準曲(qu)(qu)線(xian)(xian)：在Excel工(gong)作(zuo)表中，以標(biao)準品濃度作(zuo)橫坐標(biao)，對應OD值(zhi)作(zuo)縱坐標(biao)，繪制出標(biao)準品線(xian)(xian)性回歸曲(qu)(qu)線(xian)(xian)，按曲(qu)(qu)線(xian)(xian)方程計算各樣本濃度值(zhi)。

（此(ci)圖僅供參考）

性(xing)能(neng)：

1. 檢測范圍(wei)：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度：檢測濃(nong)度小(xiao)于1.0 pg/mL。

3.特(te)異性：不(bu)與其它(ta)可溶性結構類似物交叉反應(ying)。

4.重復性：板內變異(yi)(yi)系數(shu)小于(yu)10% ，板間變異(yi)(yi)系數(shu)小于(yu)15% 。

技術小提示：

1.當混合或重溶(rong)蛋白溶(rong)液時，盡量(liang)避免起沫(mo)。

2.為(wei)了避(bi)免交叉感(gan)染，配置不(bu)同濃(nong)度標準(zhun)品、上樣、加不(bu)同試(shi)劑都需(xu)要更換(huan)槍(qiang)頭。另外(wai)不(bu)同試(shi)劑請分別(bie)使用不(bu)同的移液槽。

3.每次(ci)孵育時，請(qing)正確(que)使用(yong)封板膠可保證結果的準確(que)性。

4.混合后(hou)的(de)顯(xian)色(se)底(di)物在上板前應為無色(se)，請避光保(bao)存；假(jia)如(ru)微孔板后(hou)，將由物色(se)變成不同深度的(de)藍色(se)。

5.終止液(ye)上板順序應同顯色底物上板順序一致；加入終止液(ye)后，孔(kong)內顏色由藍變黃；若(ruo)孔(kong)內有綠色，則表明孔(kong)內液(ye)體未混(hun)勻(yun)；請(qing)充分混(hun)合。

說明：

1.由于現有(you)條件及科學技(ji)術(shu)水(shui)平尚不能(neng)(neng)對所(suo)有(you)供貨(huo)商提供的(de)所(suo)有(you)原料進行(xing)全面的(de)鑒定與分析，本產(chan)品可(ke)能(neng)(neng)存在一定的(de)質量技(ji)術(shu)風險(xian)。

2.實(shi)(shi)驗結(jie)果(guo)與試劑的(de)有效性、實(shi)(shi)驗者的(de)相關操作以及當時的(de)實(shi)(shi)驗環境密切相關，請務必準備充(chong)足(zu)的(de)標本備份。

3.不同批(pi)次(ci)的同一(yi)產(chan)品(pin)可(ke)能(neng)會有少許差別，如：檢測限、靈敏(min)度以及顯色時間等，請(qing)依據(ju)試劑盒內說明(ming)書(shu)進行(xing)實(shi)驗(yan)操(cao)作，網站電子版說明(ming)書(shu)僅作參考。

4.只有(you)全部使用(yong)本試劑盒配(pei)套(tao)試劑才能保(bao)證檢(jian)測效果(guo)，不能混(hun)用(yong)其他制造商(shang)的產品。只有(you)嚴格(ge)遵(zun)守本試劑盒的實驗說明(ming)才會得到檢(jian)測結(jie)果(guo)。