本試劑盒僅供體外研究使用(yong)(yong)，不用(yong)(yong)于臨(lin)床(chuang)診斷

本試劑盒(he)用于體(ti)外定(ding)量檢(jian)測(ce)血清、血漿(jiang)、組織勻漿(jiang)及相關(guan)液體(ti)樣本中小(xiao)鼠(shu)5-羥色(se)胺(5-HT)的含量。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

小鼠5-羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒組成(cheng)：

備注：

1.（96T/48T）打開包裝(zhuang)后請及時檢查所有物品(pin)是否齊全。

2. 標準品濃度(du)依次(ci)為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過大量正(zheng)常標本(ben)(ben)檢驗(yan)(yan)，標本(ben)(ben)的正(zheng)常濃度(du)值(zhi)均在試劑盒(he)提供(gong)的檢測范圍內(nei)，實驗(yan)(yan)過程中直(zhi)接取(qu)50μL樣本(ben)(ben)上樣即可。當有部(bu)分樣本(ben)(ben)值(zhi)超過標準品濃度(du)時，可用樣本(ben)(ben)稀(xi)釋(shi)液將標本(ben)(ben)進行適當稀(xi)釋(shi)后再進行實驗(yan)(yan)。

檢(jian)測前(qian)準備工作：

1.請提前20分(fen)鐘(zhong)從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2.從冰箱中取出的(de)濃縮洗(xi)滌(di)液(ye)可能有(you)結晶，屬于正常現(xian)象；放(fang)置室溫，輕搖均勻(yun)，待結晶溶解后再(zai)配置洗(xi)滌(di)液(ye)。可將20ml濃縮洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾水(shui)或(huo)去離子水(shui)稀釋配置成400ml工作濃度(du)的(de)洗(xi)滌(di)液(ye)，未用完的(de)放(fang)回(hui)4℃

3.20×洗(xi)滌(di)緩沖液的(de)稀釋：蒸(zheng)(zheng)餾水(shui)按1：20稀釋，即1份(fen)20×洗(xi)滌(di)緩沖液加(jia)19份(fen)蒸(zheng)(zheng)餾水(shui)。

實驗原理(li)：

試劑盒采用(yong)雙(shuang)抗(kang)體一(yi)步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被(bei)(bei)小鼠5-羥色(se)(se)胺(an)(5-HT)捕獲抗(kang)體的包被(bei)(bei)微孔中，依次加入標(biao)本、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記的檢測抗(kang)體，經過溫育(yu)并洗滌。用(yong)底物(wu)TMB顯色(se)(se)，TMB在(zai)過氧化(hua)物(wu)酶的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色(se)(se)，并在(zai)酸(suan)的作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最終的黃色(se)(se)。顏色(se)(se)的深淺和(he)樣(yang)品中的小鼠5-羥色(se)(se)胺(an)(5-HT)呈正(zheng)相關。用(yong)酶標(biao)儀在(zai)450nm 波長下(xia)測定吸光度(du)（OD 值），計(ji)算樣(yang)品濃度(du)。

實(shi)驗(yan)所需(xu)自備試驗(yan)器材：

1.酶標(biao)儀（450nm）

2.高精度(du)加樣器及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒(heng)溫(wen)箱

4.蒸餾水或去離(li)子水

樣本處理及(ji)要(yao)求：

1.血清(qing)(qing)：將(jiang)收(shou)集于(yu)血清(qing)(qing)分(fen)離(li)管的全血標本在室溫放置2小時或(huo)4℃過夜，然后1000×g離(li)心20 分(fen)鐘，取上清(qing)(qing)即可，或(huo)將(jiang)上清(qing)(qing)置于(yu)-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免反復凍融。

2.血漿：用EDTA或(huo)(huo)肝(gan)素作為(wei)抗凝劑采集標本，并將(jiang)標本在采集后的(de)30分鐘內(nei)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或(huo)(huo)將(jiang)上清置(zhi)于-20℃或(huo)(huo)-80℃保存，但應避免反復凍融(rong)。

3.組(zu)(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：用預冷的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗組(zu)(zu)織(zhi)，去除(chu)殘留血液（勻(yun)漿(jiang)中(zhong)裂解的(de)紅(hong)細(xi)胞會(hui)影(ying)響(xiang)測量結果），稱重后將組(zu)(zu)織(zhi)剪碎(sui)。將剪碎(sui)的(de)組(zu)(zu)織(zhi)與(yu)對(dui)應體(ti)(ti)(ti)積(ji)的(de)PBS（一般按(an)1:9的(de)重量體(ti)(ti)(ti)積(ji)比，比如(ru)1g的(de)組(zu)(zu)織(zhi)樣品(pin)對(dui)應9mL的(de)PBS，具體(ti)(ti)(ti)體(ti)(ti)(ti)積(ji)可(ke)根據實驗需要適當(dang)調整，并做好記錄(lu)。推(tui)薦在PBS中(zhong)加入蛋白酶抑制(zhi)劑）加入玻璃勻(yun)漿(jiang)器中(zhong)，于冰上充分(fen)(fen)研磨(mo)。為了進一步裂解組(zu)(zu)織(zhi)細(xi)胞，可(ke)以對(dui)勻(yun)漿(jiang)液進行超聲破碎(sui)，或反復凍(dong)融。最后將勻(yun)漿(jiang)液于5000×g離心5~10分(fen)(fen)鐘，取上清檢測。

4.細胞培養物上清(qing)：請1000×g離心20分鐘，取上清(qing)即可檢測，或將上清(qing)置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

5.其(qi)它生物標本(ben)：1000×g離心20分鐘，取上(shang)清即可(ke)檢測。

6.樣品外觀：樣品應清澈透(tou)明，懸浮(fu)物(wu)應離心去除。

7.樣品保存：樣品收集后若在1周內進行檢(jian)測的可保存于4℃，若不(bu)能(neng)及(ji)時檢(jian)測，請按一次(ci)使用量分裝，凍存于-20℃（1個(ge)(ge)月內檢(jian)測），或(huo)-80℃（6個(ge)(ge)月內檢(jian)測），避免反復(fu)凍融，標(biao)本(ben)溶(rong)血會影響(xiang)檢(jian)測結(jie)果(guo)，因此(ci)溶(rong)血標(biao)本(ben)不(bu)宜進行此(ci)項檢(jian)測。

小鼠5-羥色(se)胺(5-HT)ELISA試劑盒注意事項：

1.嚴格(ge)按照規定的時間和溫度進行(xing)溫育以保證(zheng)準確(que)結(jie)果。所(suo)有(you)試劑都必須在使(shi)用(yong)前達到室溫20-25℃。使(shi)用(yong)后立即冷藏保存(cun)試劑。

2.洗板不(bu)正確可以導致不(bu)準確的結果。在加(jia)入(ru)底(di)物前確保(bao)盡量(liang)吸干孔內液體。溫育(yu)過程中不(bu)要讓微孔干燥掉。

3.消除板(ban)底殘(can)留的液體和手指印，否則影響(xiang)OD值。

4.底物(wu)顯色(se)(se)液應呈無色(se)(se)或(huo)很淺的(de)顏色(se)(se)，已經(jing)變藍的(de)底物(wu)液不能使用。

5.避免(mian)試劑和標本的(de)交叉污染以(yi)免(mian)造成(cheng)錯誤結果。

6.在(zai)儲(chu)存(cun)和溫育時避免強光直(zhi)接照(zhao)射。

7.平衡(heng)至(zhi)室溫后再打(da)開密封袋以(yi)防水滴凝(ning)聚在冷(leng)板條上。

8.任何反(fan)應(ying)試(shi)(shi)劑(ji)不能接(jie)觸漂白(bai)溶劑(ji)或漂白(bai)溶劑(ji)所(suo)散(san)發(fa)的(de)強烈氣體。任何漂白(bai)成分都會破(po)壞試(shi)(shi)劑(ji)盒中反(fan)應(ying)試(shi)(shi)劑(ji)的(de)生(sheng)物(wu)活性。

9.不能使用過期產品。

10.如果可(ke)能(neng)傳(chuan)播(bo)疾病，所有的樣品都應管理好，按(an)照規(gui)定(ding)的程序處理樣品和檢測裝(zhuang)置。

操作步(bu)驟：

1．從室溫平衡60min后(hou)的鋁箔(bo)袋(dai)(dai)中取出所需板(ban)條，剩余板(ban)條用自封袋(dai)(dai)密封放回4℃。

2．設置(zhi)標準(zhun)品(pin)孔(kong)和(he)樣本孔(kong)，標準(zhun)品(pin)孔(kong)各加(jia)不同濃度的標準(zhun)品(pin)50μL。

3．樣本孔中a加入待測樣本50μL；空白孔不(bu)加。

4．除空(kong)白孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣本孔(kong)中每孔(kong)加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗(kang)體100μL，用封板膜封住反(fan)應孔(kong)，37℃水浴鍋或(huo)恒溫箱溫育60min。

5．棄去液體，吸(xi)水(shui)紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩(shuai)去洗滌液，吸(xi)水(shui)紙上拍干，如此重復(fu)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6．每(mei)孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各50μL，37℃避(bi)光孵(fu)育15min。

7．每孔加入終(zhong)止液(ye)50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波長(chang)處測定各孔的OD值。

實(shi)驗結(jie)果計算(suan)：

繪(hui)制標(biao)準曲(qu)線(xian)：在Excel工作(zuo)表中(zhong)，以標(biao)準品(pin)濃(nong)度作(zuo)橫(heng)坐標(biao)，對(dui)應OD值(zhi)作(zuo)縱坐標(biao)，繪(hui)制出標(biao)準品(pin)線(xian)性回歸(gui)曲(qu)線(xian)，按曲(qu)線(xian)方程計算各樣(yang)本(ben)濃(nong)度值(zhi)。

（此圖僅供參考(kao)）

性能：

1. 檢測范(fan)圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度(du)：檢測濃度(du)小于1.0 pg/mL。

3.特異性：不(bu)與其(qi)它(ta)可溶性結構類似物交叉反應。

4.重(zhong)復性：板(ban)內變(bian)異系數(shu)小于10% ，板(ban)間變(bian)異系數(shu)小于15% 。

技術小提示：

1.當混(hun)合或重溶(rong)蛋(dan)白溶(rong)液時，盡(jin)量避(bi)免起沫。

2.為(wei)了避免交(jiao)叉感(gan)染，配(pei)置不同濃(nong)度標(biao)準品、上樣、加不同試劑都(dou)需(xu)要更換(huan)槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的(de)移液槽。

3.每次(ci)孵育時，請正確使用封板膠可保證結果的準確性。

4.混合后的(de)顯(xian)色(se)底(di)物在上板前應(ying)為無色(se)，請避光保存；假如微孔板后，將(jiang)由物色(se)變(bian)成不同深度(du)的(de)藍(lan)色(se)。

5.終(zhong)止(zhi)液上板(ban)順序應同(tong)顯色(se)(se)(se)底物上板(ban)順序一致；加(jia)入終(zhong)止(zhi)液后，孔內顏色(se)(se)(se)由藍變黃；若孔內有綠色(se)(se)(se)，則(ze)表明孔內液體未(wei)混(hun)勻；請充分(fen)混(hun)合。

說明：

1.由于現有(you)條件及科學技術水平(ping)尚不能對所有(you)供貨商提供的(de)所有(you)原料進行(xing)全面的(de)鑒定(ding)與分析，本產(chan)品(pin)可能存在一定(ding)的(de)質量(liang)技術風(feng)險(xian)。

2.實驗(yan)(yan)結果(guo)與試劑的(de)有(you)效性、實驗(yan)(yan)者的(de)相關操作以及當時的(de)實驗(yan)(yan)環境密切相關，請務必(bi)準備(bei)充足的(de)標本備(bei)份(fen)。

3.不同(tong)批次(ci)的(de)同(tong)一產品可能會(hui)有少許(xu)差別，如：檢(jian)測限、靈敏(min)度(du)以(yi)及顯色時間等，請依據試劑盒內說明書進(jin)行實(shi)驗操作，網站電子版說明書僅作參考。

4.只有(you)(you)全部(bu)使用本試劑(ji)盒(he)配套試劑(ji)才(cai)能(neng)保證檢測(ce)效(xiao)果(guo)，不能(neng)混用其他制造商的產品。只有(you)(you)嚴格遵守本試劑(ji)盒(he)的實驗說明才(cai)會得到(dao)檢測(ce)結(jie)果(guo)。