本試(shi)劑(ji)盒僅供體外研究(jiu)使用，不用于臨床診斷(duan)

本試劑盒用于體外(wai)定量檢測血清、血漿、組(zu)織勻(yun)漿及相(xiang)關液體樣本中人8羥基(ji)脫氧鳥苷(gan)(8-OHdG)的含(han)量。

有(you)效期：6個月(yue)

保(bao)存(cun)條件：2-8℃

人8羥基脫氧鳥(niao)苷(8-OHdG)ELISA試劑盒組成：

備(bei)注：

1.（96T/48T）打開包裝后(hou)請及時(shi)檢查(cha)所有物(wu)品是(shi)否齊全。

2. 標準(zhun)品(pin)濃度依次(ci)為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過大量正(zheng)(zheng)常標(biao)本(ben)檢驗，標(biao)本(ben)的正(zheng)(zheng)常濃(nong)(nong)度(du)值均在試劑盒提(ti)供的檢測范圍(wei)內，實(shi)驗過程中直接(jie)取50μL樣本(ben)上(shang)樣即可(ke)。當(dang)有部分樣本(ben)值超過標(biao)準品濃(nong)(nong)度(du)時(shi)，可(ke)用樣本(ben)稀(xi)釋(shi)液將標(biao)本(ben)進(jin)行適當(dang)稀(xi)釋(shi)后再進(jin)行實(shi)驗。

檢測前準(zhun)備(bei)工(gong)作：

1.請提前20分(fen)鐘從冰箱中取出試劑盒(he)，平衡至室溫。

2.從冰箱中(zhong)取出的(de)(de)濃(nong)縮洗(xi)(xi)滌液(ye)可能有結(jie)(jie)晶，屬于(yu)正常(chang)現象(xiang)；放(fang)(fang)置室溫，輕搖均勻，待結(jie)(jie)晶溶(rong)解(jie)后再配(pei)置洗(xi)(xi)滌液(ye)。可將20ml濃(nong)縮洗(xi)(xi)滌液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)或去離子水(shui)稀(xi)釋配(pei)置成400ml工作(zuo)濃(nong)度的(de)(de)洗(xi)(xi)滌液(ye)，未用(yong)完(wan)的(de)(de)放(fang)(fang)回4℃

3.20×洗滌緩(huan)沖液的稀釋：蒸餾(liu)水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩(huan)沖液加19份蒸餾(liu)水。

實驗原理：

試(shi)劑盒采用(yong)雙抗體一步夾(jia)心(xin)法酶聯免疫吸(xi)(xi)附試(shi)驗（ELISA）。往預先包(bao)被(bei)人8羥(qian)基脫氧鳥苷(8-OHdG)捕獲抗體的(de)包(bao)被(bei)微孔中，依次加入標(biao)本(ben)、標(biao)準品(pin)、HRP標(biao)記的(de)檢測抗體，經(jing)過溫育并(bing)洗滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯色(se)(se)(se)，TMB在過氧化(hua)物酶的(de)催化(hua)下(xia)轉化(hua)成藍色(se)(se)(se)，并(bing)在酸的(de)作用(yong)下(xia)轉化(hua)成黃色(se)(se)(se)。顏色(se)(se)(se)的(de)深淺和樣品(pin)中的(de)人8羥(qian)基脫氧鳥苷(8-OHdG)呈正相關。用(yong)酶標(biao)儀在450nm 波長下(xia)測定吸(xi)(xi)光度（OD 值），計算樣品(pin)濃(nong)度。

實驗(yan)所需(xu)自(zi)備試驗(yan)器材：

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣器(qi)及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫(wen)箱

4.蒸(zheng)餾水(shui)(shui)或(huo)去離子水(shui)(shui)

樣本處理(li)及要(yao)求：

1.血清：將(jiang)收集于(yu)血清分離(li)管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過(guo)夜，然后1000×g離(li)心20 分鐘(zhong)，取上清即可，或將(jiang)上清置于(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免反復(fu)凍融。

2.血(xue)漿(jiang)：用EDTA或(huo)肝素作(zuo)為(wei)抗凝(ning)劑采集標(biao)本，并(bing)將標(biao)本在采集后的30分鐘(zhong)內于(yu)2-8℃ 1000×g離心15分鐘(zhong)，取(qu)上清即可檢測，或(huo)將上清置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)應避免(mian)反復(fu)凍融。

3.組織勻(yun)漿：用預冷的(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(ye)(ye)（勻(yun)漿中裂解的(de)(de)紅細胞會影(ying)響測量(liang)結果），稱(cheng)重后將(jiang)組織剪(jian)碎。將(jiang)剪(jian)碎的(de)(de)組織與對(dui)應體(ti)(ti)積的(de)(de)PBS（一般按(an)1:9的(de)(de)重量(liang)體(ti)(ti)積比，比如1g的(de)(de)組織樣品對(dui)應9mL的(de)(de)PBS，具體(ti)(ti)體(ti)(ti)積可根據實驗需要(yao)適當調(diao)整，并做好記錄(lu)。推薦在PBS中加(jia)(jia)入蛋(dan)白酶抑(yi)制劑）加(jia)(jia)入玻璃勻(yun)漿器(qi)中，于冰上充分(fen)研磨。為(wei)了進一步裂解組織細胞，可以(yi)對(dui)勻(yun)漿液(ye)(ye)進行超(chao)聲破碎，或反復(fu)凍融。最(zui)后將(jiang)勻(yun)漿液(ye)(ye)于5000×g離心5~10分(fen)鐘，取上清檢測。

4.細胞培養(yang)物上清(qing)：請1000×g離心20分鐘，取上清(qing)即(ji)可檢測，或將上清(qing)置(zhi)于-20℃或-80℃保存，但應避(bi)免(mian)反復凍融(rong)。

5.其(qi)它生物標本：1000×g離(li)心(xin)20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢(jian)測(ce)。

6.樣品外觀(guan)：樣品應(ying)清澈透明，懸(xuan)浮物應(ying)離心去(qu)除。

7.樣(yang)(yang)品保存：樣(yang)(yang)品收集(ji)后若(ruo)在(zai)1周內(nei)進(jin)行檢(jian)測(ce)的可保存于4℃，若(ruo)不能及時檢(jian)測(ce)，請按一次使(shi)用量分裝，凍(dong)存于-20℃（1個(ge)月內(nei)檢(jian)測(ce)），或-80℃（6個(ge)月內(nei)檢(jian)測(ce)），避免反復(fu)凍(dong)融，標本(ben)溶血(xue)會影響(xiang)最后檢(jian)測(ce)結果，因(yin)此(ci)溶血(xue)標本(ben)不宜進(jin)行此(ci)項檢(jian)測(ce)。

人8羥基脫(tuo)氧鳥(niao)苷(gan)(8-OHdG)ELISA試劑(ji)盒注意事項：

1.嚴格按(an)照規定的時間和溫(wen)度進(jin)行溫(wen)育以保證準(zhun)確結果。所(suo)有試(shi)劑都(dou)必須在使用前達到(dao)室溫(wen)20-25℃。使用后立即冷(leng)藏保存試(shi)劑。

2.洗(xi)板(ban)不正確可以導致(zhi)不準確的(de)結果(guo)。在加(jia)入底物前(qian)確保(bao)盡量吸干(gan)孔(kong)內液體。溫育(yu)過程(cheng)中不要(yao)讓微孔(kong)干(gan)燥掉(diao)。

3.消除(chu)板底殘留的液體(ti)和手指印，否則影響OD值(zhi)。

4.底物(wu)顯色液應呈無色或很淺的顏(yan)色，已經變藍(lan)的底物(wu)液不能(neng)使用。

5.避(bi)免試劑和標本的交叉污染以免造成錯(cuo)誤結(jie)果。

6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7.平衡至室溫后(hou)再打(da)開密封(feng)袋以防水(shui)滴凝聚在冷板條上。

8.任何反(fan)應試劑(ji)(ji)(ji)不能接觸漂(piao)白溶劑(ji)(ji)(ji)或(huo)漂(piao)白溶劑(ji)(ji)(ji)所散發的(de)(de)強烈氣體(ti)。任何漂(piao)白成分都會(hui)破(po)壞試劑(ji)(ji)(ji)盒中反(fan)應試劑(ji)(ji)(ji)的(de)(de)生物活(huo)性。

9.不能使用(yong)過期(qi)產品。

10.如果可(ke)能傳播疾病，所有的(de)樣(yang)品(pin)都應管理好，按(an)照規(gui)定的(de)程序處理樣(yang)品(pin)和檢測裝(zhuang)置。

操作(zuo)步驟：

1．從室溫(wen)平衡60min后的鋁箔袋(dai)中取出所需板(ban)條(tiao)，剩余板(ban)條(tiao)用自封(feng)袋(dai)密封(feng)放回(hui)4℃。

2．設置標(biao)準(zhun)品(pin)孔和樣本孔，標(biao)準(zhun)品(pin)孔各加不同濃度的標(biao)準(zhun)品(pin)50μL。

3．樣本(ben)孔中(zhong)a加入待測樣本(ben)50μL；空白孔不加。

4．除空白孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣本孔(kong)中每孔(kong)加入辣根過氧化物(wu)酶(mei)（HRP）標記(ji)的檢測(ce)抗體100μL，用(yong)封板(ban)膜封住反應(ying)孔(kong)，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5．棄去液體，吸(xi)(xi)水(shui)紙上拍干，每孔(kong)加滿洗(xi)滌液（350μL），靜(jing)置1min，甩去洗(xi)滌液，吸(xi)(xi)水(shui)紙上拍干，如此(ci)重復洗(xi)板(ban)(ban)5次（也可用洗(xi)板(ban)(ban)機洗(xi)板(ban)(ban)）。

6．每(mei)孔加入底物(wu)A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7．每孔(kong)加(jia)入(ru)終止液50μL，15min內(nei)，在450nm波長(chang)處測定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值。

實驗(yan)結果計(ji)算：

繪制標(biao)準曲(qu)線(xian)(xian)：在Excel工作表中，以標(biao)準品(pin)濃度(du)作橫(heng)坐標(biao)，對應OD值(zhi)作縱坐標(biao)，繪制出(chu)標(biao)準品(pin)線(xian)(xian)性回歸曲(qu)線(xian)(xian)，按曲(qu)線(xian)(xian)方程計算各樣本濃度(du)值(zhi)。

（此圖僅供參考）

性能：

1. 檢測范圍(wei)：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈(ling)敏度(du)：檢測濃(nong)度(du)小于1.0 pg/mL。

3.特(te)異性(xing)：不與其(qi)它可(ke)溶(rong)性(xing)結構(gou)類似物交叉反應。

4.重復(fu)性：板內(nei)變(bian)異系數(shu)小(xiao)于(yu)10% ，板間變(bian)異系數(shu)小(xiao)于(yu)15% 。

技術小提示：

1.當混合(he)或重(zhong)溶蛋(dan)白溶液時，盡(jin)量避免(mian)起沫。

2.為了避(bi)免(mian)交叉感染，配置不(bu)(bu)同(tong)濃度標準品(pin)、上樣、加不(bu)(bu)同(tong)試劑都需要更換槍頭。另外不(bu)(bu)同(tong)試劑請分別使用不(bu)(bu)同(tong)的移(yi)液槽。

3.每次孵育時，請正確(que)使用(yong)封(feng)板(ban)膠可保證結果的(de)準確(que)性。

4.混合(he)后的(de)顯色(se)底物(wu)在(zai)上板前應(ying)為(wei)無色(se)，請避光保存；假如微孔板后，將由物(wu)色(se)變成不(bu)同深度的(de)藍(lan)色(se)。

5.終(zhong)止液上(shang)板(ban)順(shun)序應同顯色底物上(shang)板(ban)順(shun)序一致；加入終(zhong)止液后，孔(kong)內顏色由藍變黃(huang)；若孔(kong)內有綠(lv)色，則(ze)表明孔(kong)內液體未混勻；請充(chong)分混合。

說(shuo)明(ming)：

1.由于現有條件及科學技術(shu)水平(ping)尚不能(neng)對所有供(gong)貨商提供(gong)的(de)所有原(yuan)料進行(xing)全面的(de)鑒定與(yu)分析，本產品可能(neng)存(cun)在(zai)一定的(de)質量技術(shu)風險。

2.最終的實驗(yan)結果與試(shi)劑(ji)的有(you)效性、實驗(yan)者的相關(guan)操(cao)作以及當時的實驗(yan)環境密切(qie)相關(guan)，請(qing)務必準備(bei)充足的標本備(bei)份。

3.不同批次的同一(yi)產品可能會有少許差(cha)別，如：檢測限、靈敏度(du)以及顯色時間等(deng)，請依(yi)據試(shi)劑盒內說明書進行實驗(yan)操(cao)作(zuo)，網站電子(zi)版說明書僅作(zuo)參考(kao)。

4.只有(you)全部(bu)使(shi)用本(ben)試劑盒配(pei)套試劑才能(neng)保證檢測效果，不能(neng)混(hun)用其他制造商的產品(pin)。只有(you)嚴(yan)格遵守(shou)本(ben)試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結果。