本(ben)試劑盒僅(jin)供體外(wai)研(yan)究(jiu)使用，不(bu)用于臨床(chuang)診斷

本試劑盒用(yong)于體外(wai)定量檢(jian)測(ce)血清、血漿、組(zu)織(zhi)勻漿及相關液(ye)體樣本中大鼠8異前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)的含量。

有效(xiao)期：6個月

保存(cun)條件：2-8℃

試劑盒組成：

備注：

1.（96T/48T）打(da)開包裝后請及時檢查所有物品是(shi)否齊全。

2. 標準品濃度(du)依次為：800、400、200、100、50、25 pg/mL

3. 經過大量正常標本(ben)(ben)檢(jian)驗，標本(ben)(ben)的(de)正常濃(nong)度(du)值均在試(shi)劑(ji)盒(he)提供(gong)的(de)檢(jian)測(ce)范圍內(nei)，實(shi)驗過程(cheng)中(zhong)直接取50μL樣本(ben)(ben)上樣即可。當(dang)(dang)有部(bu)分樣本(ben)(ben)值超過標準品濃(nong)度(du)時，可用樣本(ben)(ben)稀(xi)釋(shi)液將標本(ben)(ben)進行適當(dang)(dang)稀(xi)釋(shi)后再進行實(shi)驗。

檢測前準備工作：

1.請提前20分鐘從冰箱中(zhong)取出試劑盒，平衡至(zhi)室溫。

2.從冰(bing)箱(xiang)中取出的濃(nong)(nong)縮洗(xi)滌液(ye)可能有結晶，屬于正常現象；放置(zhi)室溫，輕搖均(jun)勻，待(dai)結晶溶(rong)解后再配置(zhi)洗(xi)滌液(ye)。可將20ml濃(nong)(nong)縮洗(xi)滌液(ye)用蒸餾水或去離子水稀釋配置(zhi)成400ml工作濃(nong)(nong)度的洗(xi)滌液(ye)，未(wei)用完的放回4℃

3.20×洗滌緩沖液的稀釋(shi)：蒸餾水(shui)按(an)1：20稀釋(shi)，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水(shui)。

實(shi)驗(yan)原理：

試(shi)劑盒采用(yong)雙抗(kang)體(ti)一步夾心法酶(mei)聯免疫吸附試(shi)驗（ELISA）。往預先包被大鼠8異(yi)前(qian)列(lie)腺(xian)素F2α(8-iso-PGF2α)捕獲抗(kang)體(ti)的(de)(de)(de)包被微孔中(zhong)(zhong)，依(yi)次(ci)加入標本、標準品、HRP標記(ji)的(de)(de)(de)檢測(ce)抗(kang)體(ti)，經過(guo)溫(wen)育(yu)并洗滌。用(yong)底物TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧化物酶(mei)的(de)(de)(de)催(cui)化下(xia)轉(zhuan)化成藍色(se)，并在酸的(de)(de)(de)作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)(de)深淺(qian)和樣品中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)大鼠8異(yi)前(qian)列(lie)腺(xian)素F2α(8-iso-PGF2α)呈正相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標儀在450nm 波長(chang)下(xia)測(ce)定吸光(guang)度(du)(du)（OD 值），計算樣品濃度(du)(du)。

實驗所需自(zi)備試驗器材(cai)：

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣器及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒(heng)溫箱

4.蒸餾水或去離子水

樣本(ben)處理(li)及(ji)要(yao)求：

1.血清：將(jiang)收集于(yu)血清分離管(guan)的(de)全血標本在室溫(wen)放置2小(xiao)時或(huo)4℃過夜，然后(hou)1000×g離心20 分鐘，取上清即(ji)可，或(huo)將(jiang)上清置于(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反(fan)復凍融。

2.血漿：用(yong)EDTA或(huo)肝素作為(wei)抗(kang)凝劑(ji)采(cai)集標本，并將(jiang)標本在采(cai)集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離(li)心15分鐘，取上(shang)清(qing)即(ji)可檢測，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置于-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反復凍融(rong)。

3.組(zu)(zu)織(zhi)勻(yun)漿：用預冷的(de)(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)(zu)織(zhi)，去除(chu)殘留血液（勻(yun)漿中裂解(jie)的(de)(de)(de)紅細(xi)胞會影響測量結果(guo)），稱重后將組(zu)(zu)織(zhi)剪(jian)碎。將剪(jian)碎的(de)(de)(de)組(zu)(zu)織(zhi)與對(dui)(dui)應(ying)體積(ji)的(de)(de)(de)PBS（一般按1:9的(de)(de)(de)重量體積(ji)比(bi)，比(bi)如1g的(de)(de)(de)組(zu)(zu)織(zhi)樣(yang)品對(dui)(dui)應(ying)9mL的(de)(de)(de)PBS，具(ju)體體積(ji)可根(gen)據實驗(yan)需要適當調整，并(bing)做好(hao)記錄。推薦在PBS中加(jia)入(ru)(ru)蛋白酶抑制劑）加(jia)入(ru)(ru)玻(bo)璃(li)勻(yun)漿器中，于(yu)冰上充分研磨。為了(le)進一步裂解(jie)組(zu)(zu)織(zhi)細(xi)胞，可以對(dui)(dui)勻(yun)漿液進行超聲(sheng)破碎，或反復凍融。將勻(yun)漿液于(yu)5000×g離心5~10分鐘，取上清(qing)檢測。

4.細胞(bao)培養物上清：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存(cun)，但應避免(mian)反(fan)復凍融。

5.其它(ta)生物(wu)標本(ben)：1000×g離(li)心20分鐘，取(qu)上清(qing)即可檢測。

6.樣(yang)品外觀：樣(yang)品應(ying)清澈透(tou)明，懸浮物應(ying)離心去除。

7.樣品(pin)保(bao)存：樣品(pin)收集后若(ruo)在1周內(nei)進(jin)行檢(jian)測(ce)的可保(bao)存于(yu)4℃，若(ruo)不能及時檢(jian)測(ce)，請按(an)一(yi)次使用量分裝，凍存于(yu)-20℃（1個月(yue)內(nei)檢(jian)測(ce)），或-80℃（6個月(yue)內(nei)檢(jian)測(ce)），避免反(fan)復凍融，標本溶血(xue)會影響檢(jian)測(ce)結果，因此溶血(xue)標本不宜進(jin)行此項檢(jian)測(ce)。

大鼠8異前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)ELISA試劑盒注意事項：

1.嚴格按照規(gui)定的時間和溫(wen)度(du)進行溫(wen)育以保(bao)證準確結果。所有試劑都必須在使用(yong)前達到室(shi)溫(wen)20-25℃。使用(yong)后立即冷藏保(bao)存(cun)試劑。

2.洗板不正確(que)可以導致不準確(que)的結果。在加入底物前確(que)保盡量吸(xi)干孔內液體。溫(wen)育過程中不要讓微孔干燥掉(diao)。

3.消除板底殘留的液體和手指印，否(fou)則(ze)影響OD值。

4.底(di)物顯色液(ye)應呈無色或很淺(qian)的顏色，已經(jing)變藍(lan)的底(di)物液(ye)不(bu)能(neng)使用。

5.避免試劑和(he)標本(ben)的交叉(cha)污染以免造成錯誤結(jie)果。

6.在儲存和溫(wen)育時避免強光直接照射。

7.平衡至室溫后(hou)再(zai)打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.任(ren)何(he)(he)反應試(shi)劑(ji)不能接觸漂白(bai)溶劑(ji)或漂白(bai)溶劑(ji)所散(san)發的(de)強(qiang)烈(lie)氣體。任(ren)何(he)(he)漂白(bai)成(cheng)分都會破壞試(shi)劑(ji)盒中反應試(shi)劑(ji)的(de)生物(wu)活性。

9.不能使用過期產品(pin)。

10.如果可能傳(chuan)播(bo)疾病，所有的樣(yang)品都應管(guan)理(li)好(hao)，按照(zhao)規(gui)定的程序處理(li)樣(yang)品和檢測裝(zhuang)置。

操作步(bu)驟：

1．從室溫平衡60min后的(de)鋁箔袋中取出所(suo)需板(ban)條，剩余板(ban)條用(yong)自封(feng)袋密封(feng)放回4℃。

2．設(she)置(zhi)標(biao)(biao)準品(pin)孔和(he)樣本(ben)孔，標(biao)(biao)準品(pin)孔各加(jia)不(bu)同(tong)濃度的標(biao)(biao)準品(pin)50μL。

3．樣本孔中a加(jia)入待測樣本50μL；空白孔不加(jia)。

4．除空白孔外，標(biao)準品孔和樣(yang)本孔中每孔加入(ru)辣根(gen)過氧化物酶（HRP）標(biao)記的檢測抗體(ti)100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5．棄去液(ye)(ye)體，吸(xi)水(shui)紙上拍干(gan)，每孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye)(ye)（350μL），靜置1min，甩去洗(xi)滌液(ye)(ye)，吸(xi)水(shui)紙上拍干(gan)，如(ru)此重復洗(xi)板5次（也可用洗(xi)板機洗(xi)板）。

6．每孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7．每孔加(jia)入終止液50μL，15min內，在450nm波長(chang)處測定各孔的OD值。

實驗(yan)結果計算(suan)：

繪制(zhi)標(biao)準曲(qu)線(xian)(xian)：在Excel工作(zuo)(zuo)表中，以標(biao)準品濃度作(zuo)(zuo)橫(heng)坐標(biao)，對應OD值作(zuo)(zuo)縱坐標(biao)，繪制(zhi)出標(biao)準品線(xian)(xian)性回(hui)歸曲(qu)線(xian)(xian)，按(an)曲(qu)線(xian)(xian)方程計算(suan)各樣本濃度值。

（此圖僅供參考）

性能：

1. 檢測范圍：25 pg/mL – 800 pg/mL。

2.靈敏度：檢(jian)測濃度小于1.0 pg/mL。

3.特異性(xing)：不與其它可溶性(xing)結構類(lei)似(si)物(wu)交叉反應。

4.重復性：板內變異(yi)系(xi)數(shu)(shu)小于10% ，板間變異(yi)系(xi)數(shu)(shu)小于15% 。

大鼠8異(yi)前列腺(xian)素F2α(8-iso-PGF2α)ELISA試劑盒技(ji)術小提示：

1.當混合或重(zhong)溶蛋(dan)白溶液(ye)時，盡(jin)量避免起沫。

2.為(wei)了(le)避免交叉感(gan)染(ran)，配置不同(tong)濃度標準品、上樣、加不同(tong)試劑(ji)都需(xu)要(yao)更換槍頭。另外不同(tong)試劑(ji)請(qing)分別使用不同(tong)的(de)移液(ye)槽(cao)。

3.每次孵育(yu)時，請(qing)正確(que)(que)使用封板(ban)膠可保證結果的準確(que)(que)性。

4.混合(he)后的顯色底物在(zai)上板(ban)前應為(wei)無(wu)色，請(qing)避(bi)光(guang)保存；假如微孔板(ban)后，將(jiang)由(you)物色變成不同深度(du)的藍色。

5.終止液上(shang)板(ban)順序應同顯色底物(wu)上(shang)板(ban)順序一致；加入終止液后(hou)，孔內顏色由藍變黃；若(ruo)孔內有綠色，則表明孔內液體未混(hun)(hun)勻(yun)；請充分(fen)混(hun)(hun)合。

說明：

1.由于現有(you)條件(jian)及(ji)科學技術水平(ping)尚不能對所有(you)供(gong)貨商(shang)提供(gong)的所有(you)原(yuan)料進行全面(mian)的鑒定與分(fen)析，本產品可能存(cun)在一定的質量技術風(feng)險。

2.實驗(yan)結(jie)果與試(shi)劑的有(you)效性、實驗(yan)者(zhe)的相(xiang)關操作以及(ji)當時的實驗(yan)環境密切相(xiang)關，請務必準備充足的標本(ben)備份(fen)。

3.不同批次的同一產品可能(neng)會(hui)有少許差別，如：檢測限、靈(ling)敏度以及顯色時(shi)間等(deng)，請依據(ju)試劑盒內說明書(shu)進(jin)行實(shi)驗操作，網站電子版說明書(shu)僅作參考。

4.只有(you)全(quan)部使用(yong)本試劑(ji)(ji)盒配套試劑(ji)(ji)才能(neng)保證檢(jian)測(ce)效果，不能(neng)混用(yong)其他制(zhi)造商的產品。只有(you)嚴格(ge)遵(zun)守(shou)本試劑(ji)(ji)盒的實驗說明才會得(de)到檢(jian)測(ce)結果。