溫育是ELISA試劑盒測(ce)定(ding)中(zhong)影響測(ce)定(ding)成(cheng)敗(bai)zui為(wei)關鍵的(de)一個因素。ELISA實(shi)驗(yan)作(zuo)為(wei)一種(zhong)固相(xiang)免疫測(ce)定(ding)，抗(kang)原抗(kang)體(ti)(ti)的(de)結合(he)反(fan)應在(zai)(zai)固相(xiang)上進行，要(yao)(yao)使(shi)液相(xiang)中(zhong)的(de)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體(ti)(ti)與固相(xiang)上的(de)特異抗(kang)體(ti)(ti)或(huo)抗(kang)原*結合(he)，必須在(zai)(zai)一定(ding)的(de)溫(wen)(wen)度條件下(xia)反(fan)應一定(ding)的(de)時(shi)間。溫(wen)(wen)育所(suo)需(xu)時(shi)間與溫(wen)(wen)度成(cheng)反(fan)比，即溫(wen)(wen)度越高，則所(suo)需(xu)時(shi)間相(xiang)對較(jiao)短。在(zai)(zai)ELISA中(zhong)一般有兩(liang)次抗(kang)原抗(kang)體(ti)(ti)反(fan)應，即加標本和(he)(he)加酶(mei)結合(he)物(wu)后。抗(kang)原抗(kang)體(ti)(ti)反(fan)應的(de)完成(cheng)需(xu)要(yao)(yao)有一定(ding)的(de)溫(wen)(wen)度和(he)(he)時(shi)間，這一保(bao)溫(wen)(wen)過程稱(cheng)為(wei)溫(wen)(wen)育(incubation)，也被(bei)稱(cheng)之為(wei)孵育。這是一個逐步平衡的(de)過程，因此需(xu)經擴散才能(neng)達(da)到(dao)反(fan)應的(de)終點。在(zai)(zai)其(qi)后加入的(de)酶(mei)標記(ji)抗(kang)體(ti)(ti)與固相(xiang)抗(kang)原的(de)結合(he)也同(tong)樣如此。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時，產物的生成可達。為加速反應，可提高反應的溫度，ELISA試劑盒有些試驗在(zai)43℃進(jin)行(xing)，但不(bu)宜采用(yong)更高的(de)溫度。抗(kang)原抗(kang)體反應4℃更為*，在(zai)放(fang)射免疫測定中多使反應在(zai)冰箱中放(fang)置一(yi)晚上，以形(xing)成zui多的(de)沉淀。但因所需時間(jian)太長(chang)，在(zai)ELISA中一(yi)般不(bu)予采用(yong)。