1、 正式試驗(yan)(yan)時，應(ying)分別以陽性對(dui)照與陰(yin)性對(dui)照控制試驗(yan)(yan)條件，待檢樣品應(ying)作一式二份，以保(bao)證實驗(yan)(yan)結(jie)果的準確(que)性。有時本底較高(gao)，說明(ming)有非特異性反(fan)應(ying)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2、 在小鼠ELISA試劑盒中(zhong)，進(jin)行各項實驗條件的選擇是很重要(yao)的，其中(zhong)包括:

(1) 固相(xiang)載體(ti)的選擇：許多物(wu)質(zhi)可作(zuo)為固相(xiang)載體(ti)，如(ru)聚氯乙(yi)烯(xi)、聚苯(ben)乙(yi)烯(xi)、聚丙酰(xian)胺和纖維素等(deng)。其形式可以是凹孔平板(ban)、試(shi)管(guan)、珠粒等(deng)。目前常(chang)用的是40孔聚苯(ben)乙(yi)烯(xi)凹孔板(ban)。不管(guan)何種載體(ti)，在使(shi)用前均可進(jin)行(xing)篩選：用等(deng)量抗原(yuan)包(bao)被(bei)，在同一(yi)實驗條件下進(jin)行(xing)反應，觀察其顯色反應是否(fou)均一(yi)性(xing)，據此判明其吸附性(xing)能是否(fou)良好。

(2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好，吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響，一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后，小鼠ELISA試劑盒在其它試驗條(tiao)件(jian)相(xiang)同時，觀察陽(yang)性標本的OD值。選擇(ze)OD值zui大而蛋(dan)白量zui少的濃度(du)。對于多(duo)數蛋(dan)白質來說通常(chang)為1～10μg/ml.

(3) 酶(mei)標記抗體工(gong)作(zuo)濃度(du)的選擇：首(shou)先用直接ELISA法(fa)進行初步(bu)效價的滴定(ding)(見(jian)酶(mei)標記抗體部份)。然后再固定(ding)其它條件或(huo)采取“方陣法(fa)”(包被物(wu)、待(dai)檢(jian)樣品(pin)的參考(kao)品(pin)及酶(mei)標記抗體分(fen)別為不同的稀釋度(du))在正(zheng)式(shi)實驗系統里準確地滴定(ding)其工(gong)作(zuo)濃度(du)。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。小鼠ELISA試劑盒有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供(gong)氫體，如TMB和(he)ABTS是目前(qian)較為滿意的供(gong)氫體。