本人在剛開始做大鼠ELISA試劑盒時就面臨很多困難，雖然有師兄師姐鋪路，但還是常常做得一塌糊涂，比如說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低。。。。。。自己也為此苦惱過很長一段時間，隨著自己技術水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現在做方陣，做ELISA已是輕車熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日基本搞定。

下(xia)面就由我拋磚引玉地(di)來說一下(xia):

1.正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、大鼠ELISA試劑盒兔血清(qing)或BSA等封(feng)閉。

2.在ELISA中，進行各(ge)項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）固(gu)相(xiang)載(zai)體的(de)選(xuan)擇：許多(duo)物質可(ke)作為(wei)固(gu)相(xiang)載(zai)體，如聚(ju)氯乙烯(xi)、聚(ju)苯乙烯(xi)、聚(ju)丙酰胺和纖維(wei)素等(deng)。其形式可(ke)以是(shi)凹孔平板、試管、珠粒(li)等(deng)。目前常用(yong)(yong)的(de)是(shi)40孔聚(ju)苯乙烯(xi)凹孔板。不(bu)管何種載(zai)體，在使用(yong)(yong)前均可(ke)進(jin)行篩選(xuan)：用(yong)(yong)等(deng)量(liang)抗原包被，在同一實驗條(tiao)件(jian)下進(jin)行反應，觀察其顯色反應是(shi)否均一性，據此判明其吸附性能是(shi)否良好。

（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。大鼠ELISA試劑盒蛋白(bai)(bai)質包(bao)被的(de)(de)zui適濃度需進行滴定：即用不同(tong)的(de)(de)蛋白(bai)(bai)質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包(bao)被后，在其它試驗條件相同(tong)時(shi)，觀察陽性標本的(de)(de)OD值。選擇OD值zui大而蛋白(bai)(bai)量zui少的(de)(de)濃度。對(dui)于多(duo)數蛋白(bai)(bai)質來說通常為1～10μg／ml。