ELISA細節盤點

1. 樣本收集

每個(ge)標(biao)(biao)(biao)本量收集(ji)體積=100ulx檢測指標(biao)(biao)(biao)，如(ru)要(yao)(yao)做復孔(kong)，標(biao)(biao)(biao)本量收集(ji)體積=10Oul×檢測指標(biao)(biao)(biao)×2。對收集(ji)后當天進行(xing)檢測的標(biao)(biao)(biao)本，儲存(cun)在(zai)4℃備(bei)用(yong)，如(ru)有特(te)殊原因(yin)需要(yao)(yao)周期收集(ji)標(biao)(biao)(biao)本，將標(biao)(biao)(biao)本及時分(fen)裝后放在(zai)-20°℃或(huo)-70°℃條件下保存(cun)，避免反復凍融。標(biao)(biao)(biao)本2-8℃可保存(cun)48小(xiao)時，-20°℃可保存(cun)1個(ge)月。-70度可保存(cun)6個(ge)月。部分(fen)激(ji)素(su)類標(biao)(biao)(biao)本需添(tian)加抑肽酶(mei)。如(ru)需離心的樣本，離心轉速不(bu)宜過(guo)高(2000~3000)

2. ELISA加樣

加樣(yang)品時，單孔用(yong)量要求: ≥50ul/指標(biao)，如需要做2個(ge)復孔則血(xue)量≥100ul/指標(biao)。如果樣(yang)本量不充(chong)足，具(ju)體用(yong)量可咨詢您的專屬銷售。

3. 樣品捕(bu)獲抗(kang)體孵育(yu)

37C恒溫(wen)孵育，避免溫(wen)度變化(hua)過大(da)

4. 洗滌

機洗(xi): 將(jiang)25x×洗(xi)滌緩(huan)沖液稀釋成1×，1×洗(xi)滌緩(huan)沖液洗(xi)三次，每次加300uL浸泡60s手洗(xi):手洗(xi)次數應(ying)比機洗(xi)次數多，浸泡時間也(ye)應(ying)適(shi)當延長

手洗(xi)容易導致吸(xi)附在酶標(biao)板底(di)部的試劑脫落，從而導致結(jie)果偏小，手洗(xi)次(ci)數過多也會影響(xiang)實驗(yan)結(jie)果，建議機洗(xi)

5. 底物顯色（TMB顯色) 孵育

TMB在使用前應放置室溫平衡30分鐘，加的量為A、B各50uL

6. ELISA終止液終止反應

加完TMB終止液應(ying)讓其(qi)混(hun)勻再(zai)在(zai)酶(mei)標儀上讀(du)數(shu)

7. 酶標儀讀數

在450nm波長(chang)處(chu)測定(ding)O.D值

8. 根據O.D值計算樣本濃度

使(shi)用軟件擬合(he)(he)標準曲線，根據(ju)標準曲線的擬合(he)(he)度(r或R2）以(yi)及殘差(cha)平方和（s）選擇合(he)(he)適的曲線。

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