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    常溫細胞處理方式

    發布時間: 2023-06-06  點擊次數: 748次

    細胞(Cells)是由英(ying)國科學家羅(luo)伯特·胡(hu)克(Robert Hooke,1635~1703)于1665年發(fa)現(xian)的(de)。當時他用(yong)自制的(de)光學顯(xian)微鏡觀察軟(ruan)木塞的(de)薄切片,放(fang)大后發(fa)現(xian)一(yi)(yi)格(ge)一(yi)(yi)格(ge)的(de)小(xiao)空間, [1] 就以英(ying)文的(de)cell命名之,而這個英(ying)文單字(zi)的(de)意義本身就有小(xiao)房(fang)間一(yi)(yi)格(ge)一(yi)(yi)格(ge)的(de)用(yong)法,所以并非另創(chuang)的(de)字(zi)匯。

    當收到(dao)了(le)常(chang)溫的(de)細胞,正確的(de)處理方式應該是怎樣的(de)。

    一、首先(xian),觀察細胞培養(yang)(yang)瓶是(shi)否完好(hao),培養(yang)(yang)液(ye)是(shi)否有漏液(ye)、渾(hun)濁等現象。

        二、用75%酒精擦拭細胞(bao)培養(yang)瓶表面,顯微鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問題,部分貼壁細胞(bao)會有(you)少(shao)量叢瓶壁脫落;先不(bu)要打開培養(yang)瓶蓋,將細胞(bao)置于細胞(bao)培養(yang)箱內趨置培養(yang)2-4小時(shi),以便穩定(ding)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。

        三(san)、仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明書,了解細(xi)胞(bao)相關信息,如貼壁特性(xing)(貼壁/懸浮)、細(xi)胞(bao)形態、所用基(ji)礎培養基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所需細(xi)胞(bao)因子(zi)、傳代比(bi)例(li)、換(huan)液頻率(lv)等。

        四、靜(jing)置完成(cheng)后,取出細(xi)胞(bao)培養(yang)瓶,鏡(jing)檢、拍照(zhao),記(ji)(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態(tai);建議(yi)細(xi)胞(bao)傳代培養(yang)后,定(ding)期拍照(zhao)、記(ji)(ji)錄細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)。

        五、貼壁細胞:若細胞生長密(mi)度超過80%,可正常傳代;若未(wei)超過80%,移除細胞培(pei)養(yang)瓶內培(pei)養(yang)基,預留5m左右繼(ji)續培(pei)養(yang),直至細胞密(mi)度達80%左右再進(jin)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松(song)。

    六、懸浮細(xi)(xi)胞(bao)(bao):將細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)內液體全部轉移至(zhi)(zhi)50ml無菌離(li)心管內,1200rpm離(li) 心5min,離(li)心后上(shang)清培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)可(ke)收集備(bei)用,管底細(xi)(xi)胞(bao)(bao)沉淀加(jia)入5m培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)吹(chui)打、重懸。鏡檢(jian)時,若細(xi)(xi)胞(bao)(bao)密(mi)度(du)超過(guo)80%,可(ke)將細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液分至(zhi)(zhi)2個細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶(ping)內培(pei)(pei)養(yang)(yang),補加(jia)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)至(zhi)(zhi)5ml;若細(xi)(xi)胞(bao)(bao)密(mi)度(du)未超過(guo)80%,將細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液移至(zhi)(zhi)原瓶(ping)繼續培(pei)(pei)養(yang)(yang),直至(zhi)(zhi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)密(mi),度(du)達80%左右時再(zai)進行(xing)傳(chuan)代操作。

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