原代細胞是通過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環境條件下分離的細胞在體外或其他人體和動物體內生長。

原代(dai)細(xi)胞的(de)提(ti)取方法詳(xiang)細(xi)步驟：

1.整個操作要在潔凈通風的超凈臺下進(jin)行(xing)，所有的器材要高壓消(xiao)毒(du)。

2.根據BALB/c小鼠的(de)體重，將小鼠置于(yu)盛有(you)75%乙醇的燒杯內，這一(yi)步不(bu)僅可以(yi)消毒，也可以(yi)讓小鼠體(ti)毛浸濕，后續剃(ti)去皮毛的時(shi)候(hou)不(bu)會沾到(dao)剪刀或組織上。

3.用鑷子輕輕挑起(qi)小(xiao)鼠的心(xin)臟(zang)，裝有PBS的注射(she)器插入心(xin)尖，同時在(zai)右心(xin)耳處(chu)剪開一(yi)個小(xiao)口，緩慢推動(dong)注射(she)器，隨(sui)著(zhu)心(xin)臟(zang)的跳動(dong)，將(jiang)體(ti)內的血液(ye)沖洗出來。

4.取出小(xiao)(xiao)鼠的(de)(de)肺(fei)(fei)部組織，將肺(fei)(fei)組織切成小(xiao)(xiao)米粒樣的(de)(de)大小(xiao)(xiao)，置于預冷(leng)的(de)(de)HBSS中反復沖洗(xi)幾次。

5.將小(xiao)(xiao)米粒大(da)小(xiao)(xiao)的肺(fei)組(zu)織置(zhi)(zhi)于培(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)中（培(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)前(qian)一天(tian)用(yong)1%明膠溶液包被培(pei)養(yang)(yang)(yang)面，4度(du)過夜，小(xiao)(xiao)鼠處(chu)理前(qian)，將培(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)放置(zhi)(zhi)培(pei)養(yang)(yang)(yang)箱中，使其溫度(du)恢(hui)復至37度(du)），置(zhi)(zhi)于培(pei)養(yang)(yang)(yang)箱37度(du)的環境下(xia)，消化4個(ge)小(xiao)(xiao)時(shi)。

6.消化4小(xiao)時后，加入培(pei)養基（添加培(pei)養基，可以是正(zheng)常培(pei)養時的(de)2倍量），繼續(xu)(xu)培(pei)養24小(xiao)時（繼續(xu)(xu)培(pei)養的(de)時間可根據細胞貼壁(bi)情況(kuang)適當調整）。

7.24小時后，取(qu)出肺組織，鏡下(xia)觀察細(xi)胞狀態，換液。

8.原代(dai)細胞的提(ti)取和培養是(shi)很(hen)慢的過程，一般(ban)需等到24小(xiao)時后(hou)，才(cai)能在鏡下(xia)看到些許細胞群，一周到兩周后(hou)才(cai)會(hui)看到鵝卵石(shi)樣的排列(lie)情況。

9.原代細胞2-3天換液一次，因為內皮細胞生長形成單層時，會出現接觸抑制現象。所以，內皮細胞生長接近單層時就可以傳代了，不要等到長得非常滿。

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